narkotika 3

halaman    3

1. Jenis-jenis Specimen  

specimen  klinis untuk uji toksikologis dapat dibagi menjadi: (i) cairan darah dan cairan  terkait, (ii) cairan tubuh selain darah, (iii) cairan atau residu eksretori, dan (iv) spesimen klinis  lainnya  beberapa  spesimen tambahan dapat dihimpun  untuk tujuan 

toksikologi. aksi  pencegahan khusus akan diperlukan  untuk analit yang tidak stabil.  Sebagian besar senyawa yang diukur dalam urin dapat dianggap stabil setidaknya beberapa  jam pada suhu kamar sebab  urin mungkin sudah  ditahan pada suhu tubuh untuk beberapa  saat sebelum dikeluarkan ,

aa.. Urin

Spesimen urin yang berbeda, contoh nya acak, pagi hari, 24 jam, dapat dihimpun  dalam  perjalanan riset  metabolik atau lainnya. Dalam riset  metabolisme, perlu untuk mencatat  waktu awal dan akhir periode pengumpulan sehingga tingkat produksi urin dapat dihitung.  specimen  urin acak yaitu  spesimen midstream – diberi pengawet, seperti 2 mol asam klorida  per liter ditambahkan sesudah nya. Urin segar berwarna kuning  atau  kuning-hijau, namun pada 

penyimpanan dalam larutan asam berubah warna menjadi kuning  atau  coklat dan bahkan sampai 

coklat tua sebab  oksidasi urobilinogen menjadi urobilin. Kristal, terutama asam urat dan .kalsium oksalat, memicu   kekeruhan. Spesimen urin acak, pagi hari, atau end-of-shift dihimpun , yaitu  cara umum untuk  menghubungkan hasil analisa  tertentu dengan konstituen urin 'tetap' seperti kreatinin, yang 

dianggap diekskresikan pada tingkat yang relatif konstan pada subjek normal. .Konsentrasi banyak obat dan metabolit, dan beberapa konstituen endogen, akan tetap  sama dalam urin yang diasamkan selama lebih dari seminggu pada suhu kamar, dan sampai

satu bulan pada 2-8 oC. Urin yang tidak diasamkan mengalami serangan mikrobiologis dan  banyak perubahan terjadi, termasuk hilangnya asam amino.

bb..Isi lambung

Spesimen ini meliputi muntahan, aspirasi lambung dan cairan lambung dan  isi perut .pada postmortem. Sifat specimen  ini bisa   bervariasi dan prosedur tambahan seperti .homogenisasi diikuti dengan penyaringan dan  atau  atau sentrifugasi mungkin diperlukan untuk 

menghasilkan cairan yang diperiksa.

cc.. Faeces

analisa  feces jarang dilakukan, namun kadang analisa  obat dan mungkin   metabolit mungkin diperlukan dalam riset  farmakokinetik dan metabolisme. analisa  mungkin  juga diminta bila , contoh nya, muncul pertanyaan tentang kebocoran obat dari paket obat 

antemortem yang ditelan. Tidak seperti plasma, urin, dan specimen  cairan lainnya, faeces tidak 

homogen, dan sebab  itu sering  diperlukan untuk menganalisa  keseluruhan specimen   atau menghomogenkan seluruh specimen  dan membuktikan bahwa fraksi yang diambil untuk 

analisa  mewakili keseluruhan. Diperlukan lebih dari sehari sebelum obat oral atau metabolit obat muncul dalam faeces.

dd.. Darah 

--Darah dan cairan terkait

--- Darah tali pusat diperoleh dari tali pusat saat parturisi. Biasanya darah tali pusat diperoleh 

untuk mencerminkan neonatal, berlawanan dengan darah plasenta. Untuk memperoleh   plasma atau serum tergantung pada volume yang tersedia

--- Plasma yaitu  bagian cairan darah yang diperoleh dengan penambahan anticoagulant6) Serum yaitu  cairan kuning pucat yang tersisa saat seluruh darah membeku.  Komposisinya   sama dengan plasma kecuali fibrinogen dan faktor yang terkait  dengan proses penggumpalan tidak ada. 

---Darah utuh (whole blood...  yaitu  cairan yang bersirkulasi melalui arteri, kapiler dan vena.  Tubuh kita  dewasa mengandung sekitar 5-6 liter darah. Ini terdiri dari plasma dan sel  darah. bila  seluruh darah dianalisa , specimen  harus dihimpun  ke dalam antikoagulan 

yang tepat, dicampur, dan lalu  dibekukan untuk melisiskan sel sebelum analisa  ( darah tersembunyi yaitu  darah yang ditemukan hanya dalam jumlah jejak 

terutama pada faeces. Ini tidak dipakai  sebagai specimen  analitis).

--- Sel darah termasuk sel darah merah (eritrosit) dan sel darah putih (limfosit, leukosit ,trombosit)  . Semua dapat diperoleh dari darah yang baru dihimpun  dengan prosedur  yang sesuai. 

--- Cairan serebrospinal (cerebrospinal fluid = CSf...  yaitu  ultrafiltrasi plasma (komposisinya  yaitu  plasma kecuali protein MR tinggi yang tidak ada... yang mengelilingi elemen sistem  saraf pusat (SSP). Cairan ini diperoleh dengan tusukan lumbal (aspirasi jarum dari sumsum .tulang belakang...  dan  dihimpun  ke dalam tabung steril.

--Darah arteri biasanya dihimpun  oleh pasien   praktisi medis yang berpengalaman  sebab  ini yaitu  prosedur yang relatif berbahaya, dilakukan untuk pengukuran gas darah dan  biasanya tidak diajukan untuk analisa  toksikologi. Darah kapiler, yang mendekati darah  arterial, dapat diperoleh dengan menusuk tumit, lobang jari atau telinga, prosedur ini paling  sering dilakukan pada anak kecil.

--Darah vena

Darah vena diperoleh dengan venepuncture (biasanya... vena median cubital lengan yang  jauh dari lokasi infus. Dapat memakai  spuit dan jarum suntik (1-50 mL) atau sistem  sampling vakum komersial seperti Vacutainer dapat dipakai . Sebuah turniket dapat  dipakai  untuk membendung vena sebelum venepuncture, namun harus segera dilepaskan  sebelum pengambilan specimen . Untuk sampling berulang, kanula kecil dapat dimasukkan ke  dalam pembuluh darah di lengan atau tangan, yang memungkinkan akses vena melalui 

septum karet. Namun, patensi mungkin menjadi masalah sebab  ada risiko: (i) menginduksi  hemolisis dan (ii) kontaminasi spesimen sebab  pemakaian larutan antikoagulan dengan alat  itu . sesudah  venepuncture, darah harus dipindahkan ke tempat  yang tepat secepatnya  Beberapa analit dasar dan senyawa amonium kuaterner, contoh nya antidepresan trisiklik dan  paraquat, dan aluminium terikat pada kaca. Tabung plastik lebih disukai dan juga cenderung 

pecah dibandingkan  kaca, terutama bila  dibekukan. Di sisi lain, bila  pelarut volatil atau gas anestesi, 

contoh nya, harus dianalisa  maka gelas lebih disukai bila  tersedia. bila  darah sudah  dihimpun  ke dalam spuit, jarum harus dikeluarkan dan darahnya dibiarkan 

mengalir dengan lancar ke dalam tabung specimen  untuk mencegah hemolisis. lalu  diikuti  dengan pencampuran lembut untuk memastikan kontak dengan antikoagulan, bila  dipakai . Bahkan hemolisis ringan pun akan memicu  besi serum atau tes kalium berlebih, dan  mungkin memicu  analit lain dalam plasma atau serum terkonsentrasi pada sel darah  merah seperti chlortalidone meninggalkan plasma atau serum yang kontak dengan sel darah  merah, memicu   perubahan sebab  aktivitas enzimatik atau resebaran  analit 

antara sel dan plasma.  , plasma atau serum harus dipisahkan dari sel darah  secepatnya bila  perlu, seluruh darah dapat disimpan pada suhu -20oC atau di  bawahnya, namun pembekuan akan melisiskan sebagian besar jenis sel. perlu untuk memakai  serum atau plasma dengan antikoagulan yang  disarankan  untuk pengukuran tertentu dan tidak mengganti alternatif tanpa .pertimbangan lagi. Tabung yang mengandung 0,5 atau 1 mL antikoagulan natrium sitrat 

dalam larutan berair dan sebab nya tidak sesuai untuk pekerjaan kuantitatif. lalu  ,  pengenceran specimen  dapat mengurangi tingkat pengikatan protein plasma dan akibatnya  sebaran  analit plasma - sel darah merah. Harus dipastikan bahwa antikoagulan heparin 

lithium tidak dipakai  bila  lithium plasma diukur. Heparin juga sudah  diketahui mengganggu 

dalam analisa  obat.

ee..Cairan tubuh selain darah

-Cairan sinovial yaitu  cairan pelumas yang jernih dan kental yang mengisi synovium  (membran yang mengelilingi sendi dan menciptakan kantung pelindung... 

- Air mata yaitu  sekresi air mata yang jernih pada mata

- Cairan vagina yaitu  sekresi kental vagina

- Vitreous humor yaitu  cairan transparan dan kental yang terkandung di balik lensa di mata.

-. Cairan amnion yaitu  cairan yang mengelilingi janin di kantung amnion

-Aqueous humor yaitu  cairan berair yang menempati ruang antara kornea dan iris mata

- ASI yaitu  cairan kaya protein dan lemak yang diproduksi oleh ibu menyusui. Ekskresi pertama ASI (kolostrum)   kaya akan protein

-Semen diproduksi oleh testis dan kelenjar prostat, dan terdiri dari cairan mani (yang bisa  diperoleh  dari semen dengan sentrifugasi), dan spermatozoa.

- Aspirasi empedu yaitu  cairan asam yang mengandung enzim pencernaan, makanan, dan 

sebagainya, diperoleh dengan aspirasi dari lambung.

- Getah bening yaitu  cairan kekuningan yang berasal dari kelenjar getah bening

- Cairan peritoneal yaitu  cairan yang menumpuk di peritoneum

- Air liur yaitu  sekresi kelenjar mukosa yang kental dan jernih di mulut. Cairan ini terkait  dalam komposisi plasma, namun  juga mengandung beberapa enzim pencernaan.

ff..Cairan  atau  residu ekskresi

- Empedu yaitu  cairan kuning-hijau tebal yang disekresikan oleh hati melalui kandung  empedu ke dalam usus

- Udara yang dihembuskan (ekspirasi)   mengandung sedikit oksigen dan lebih  banyak karbon dioksida dan uap air dibandingkan  udara sekitar, namun mungkin mengandung  produk metabolik volatil lainnya.

-Faeces yaitu  residu proses pencernaan yang berwarna coklat dan semi solid

-Keringat yaitu  cairan berair yang diekskresikan oleh pori-pori kulit

-Urin yaitu  cairan kuning  atau  kuning-hijau yang dihasilkan oleh ginjal, terutama terdiri dari  air, garam, urea, kreatinin, dan produk metabolik lainnya. 

-Spesimen jaringan diperoleh dengan pembedahan atau postmortem. Jaringan yang  diperoleh dari janin dan  atau  atau plasenta kadang dapat dipakai  untuk analisa ,

- specimen  biopsi yaitu  specimen  kecil jaringan yang diperoleh dengan metode  sampling spesialis,

-Muntahan mencerminkan komposisi aspirasi gastrik,

-Bronchoalveolar lavage (BAL) diperoleh dengan mencuci bronkus  atau  alveoli dengan larutan 

yang tepat dan aspirasi cairan yang dihasilkan.

-Calculi ('batu') yaitu  endapan kristal keras yang terbentuk di berbagai rongga tubuh seperti ginjal

-Cairan dialisis (extracorporeal atau peritoneal) yaitu  cairan yang tersisa sesudah  dialisis  sudah  dilakukan

-Gastric lavage yaitu  spesimen yang diperoleh dengan cara mencuci lambung dengan larutan yang tepat dan aspirasi cairan yang dihasilkan

-Rambut (kepala, aksila, atau kemaluan) kadang dipakai  untuk menilai keterpaparan .baru-baru ini pada  racun seperti obat terlarang atau logam berat

- Isi perut dari (i) aspirasi gastrik, (ii) cuci lambung, (iii) muntahan, atau (iv) residu di perut  saat otopsi 

- Potongan kuku atau kuku (jari atau kaki) kadang dipakai  untuk menilai terpapar obatobatan terlarang atau logam berat,

- Swab (olesan) hidung yaitu  cairan yang dihimpun  ke kapas dari dalam hidung,

-Cairan oral yaitu  campuran air liur, cairan gingivial crevicular (cairan antara gigi  atau  gusi), sisa-sisa seluler, darah, lendir, partikel makanan, dan bahan lain yang dihimpun  dari  mulut.

gg... Sel darah

Untuk mengumpulkan eritrosit, darah heparinisasi disentrifugasi (2000 g, 10 menit),  plasma, buffy coat dan 10% eritrosit teratas (terutama retikulosit) dikeluarkan, dan sisa  eritrosit dicuci dengan larutan garam isotonik, untuk menghilangkan plasma yang 

terperangkap. Sel dapat dipakai  secara langsung atau beku, baik untuk memicu   hemolisis, atau untuk penyimpanan. Trombosit biasanya diisolasi dengan sentrifugasi yang  lambat (contoh nya 300 g, 15 menit) dari darah utuh untuk menghasilkan plasma kaya trombosit, .lalu  disentrifugasi (2000 g, 10 menit) untuk memisahkan trombosit. Sel darah putih  lainnya paling sering diperoleh dengan sentrifugasi melalui media kepadatan yang sesuai  (sesuai petunjuk pabriknya... atau diisolasi dengan metode  antibodi fase padat.

hh.. Serum

Bila darah utuh dibiarkan (15 menit, suhu kamar) dalam tabung kosong (tidak ada  antikoagulan), bentuk gumpalan yang  ditarik cukup untuk memungkinkan serum  dihimpun . Untuk banyak analisa , serum lebih disukai dibandingkan  plasma sebab  menghasilkan lebih sedikit presipitat (fibrin) pada pembekuan dan pencairan.

ii..Plasma

Pemisahan plasma dari darah utuh dengan antikoagulan biasanya memerlukan  sentrifugasi. Hubungan antara diameter rotor dari pusat, kecepatan sentrifugasi dan gaya  sentrifugal relatif (G-force...  ditetapkan.  Pada sentrifugasi darah utuh dengan antikoagulan (2000 g, 10 menit, 2-8 oC bila  perlu), 

maka akan terpisah menjadi tiga lapisan: lapisan bawah (biasanya sekitar 45% volume...  terdiri 

dari sel darah merah; lapisan tipis antara sel darah putih dan platelet dinamakan  'buffy coat' yaitu  lapisan berikutnya; dan lapisan atas, berair, berwarna jerami yaitu  plasma (sekitar  50% v atau v). Asalkan analit stabil, darah utuh dan antikoagulan dapat disimpan pada suhu kamar  atau didinginkan (2-8oc...  selama dua hari atau lebih sebelum plasma dipisahkan. Lebih banyak plasma dapat dipisahkan dari darah utuh dibandingkan  serum. Beberapa  tabung komersial mengandung zat seperti manik-manik plastik atau gel yang berada pada  antarmuka antara sel dan plasma untuk membantu pengumpulan plasma. Gel pemisah (gel separator) memicu   masalah pada analisa  beberapa obat walaupun gel yang  diformulasikan sudah  diklaim memiliki sedikit efek pada pengukuran obat terapeutik, tabung  yang mengandung gel pemisah sebaiknya dihindari. pemakaian tabung semacam itu akan .memicu  banyak analit trace elemen tidak ada dan dapat mengganggu analisa  untuk pelarut 

dan volatil lainnya.

2.Pedoman Pengumpulan Specimen  Toksikologis

Banyak prosedur toksikologi analitis memerlukan pengumpulan darah, urin, isi lambung, dan 'residu  ', yaitu bahan, botol, tablet atau semacamnya yang ditemukan di area   kejadian . specimen  cairan dan jaringan lain yang sesuai juga harus dihimpun  

secara rinci, terutama saat menyelidiki kematian, namun mungkin tidak diperlukan untuk  analisa  kecuali bila  diperlukan penyelidikan khusus.: Volume yang lebih kecil sering  bisa diterima, contoh nya dalam masalah  anak kecil,Hanya ada sedikit informasi tentang sebaran  obat dalam jaringan padat pada kita ;  koleksi sekitar 5 g spesimen dari beberapa lokasi pada organ seperti otak disarankan , bila   keseluruhan organ tersedia. Organ hati diambil lobus kanan.  bila  keracunan dicurigai, specimen  darah 10 mL (tabung heparin lithium atau EDTa... dapat  diambil dari pasien  dewasa (secara proporsional kurang dari anak kecil) secepatnya 

contoh nya sesudah  masuk rumah sakit. juga , 2 mL darah harus dihimpun  dalam tabung  fluoride  atau  oksalat bila  dicurigai etanol. Perhatikan bahwa tabung jenis ini untuk pemakaian  klinis hanya mengandung sekitar 0,1% (w atau v) fluorida, sedang  sekitar 2% (w atau v) fluorida (40 mg sodium fluorida per 2 mL darah) diperlukan untuk menghambat sepenuhnya aktivitas mikroba pada spesimen. Penambahan fluoride   melindungi obat labil lainnya  seperti clonazepam, kokain, dan nitrazepam dari degradasi. pemakaian penyeka desinfektan  yang mengandung alkohol harus dihindari, gunakan antikoagulan larutan heparin yang 

mengandung pengawet fenol.

3.. Pengambilan Dan Penanganan Specimen  

 , spesimen biologis harus disimpan pada suhu 4oC sebelum diangkut ke  laboratorium. Pengecualian untuk ini termasuk rambut dan kuku, yang stabil pada suhu 

kamar, dan kertas saring yang serapan  darah kering, yaitu   cara  menyimpan dan mengangkut specimen  darah untuk analisa  tertentu bila  transportasi dan 

penyimpanan berpendingin tidak ada. Setiap botol spesimen harus disegel dengan aman untuk mencegah kebocoran, dan  dikemas secara terpisah dalam kantong plastik terpisah. Perhatian khusus harus diberikan  pada kemasan specimen  yang  dikirim melalui pos atau kurir agar sesuai dengan peraturan 

kesehatan , Volume specimen  atau jumlah yang lebih kecil   cukup memadai untuk melengkapi analisa  yang diperlukan . Pengiriman specimen  yang   kecil dapat mengurangi peka dan cakupan analisa  yang 

dilakukan, namun specimen  semacam itu harus selalu diteruskan ke laboratorium. Spesimen sisa 

harus disimpan pada suhu -20oC atau di bawah sampai penyelidikan atas kejadian sudah  selesai.

Dalam pemeriksaan postmortem, pemakaian tabung plastik keras sekali pakai  (polystyrene...  steril disarankan . bila  tidak tersedia, tempat  dengan penutup yang aman  sesuai dengan volume spesimen harus dipakai . Beberapa laboratorium menyediakan 

tempat  spesimen untuk mengumpulkan spesimen darah dan urine postmortem. perlu  untuk dicatat bila  urin diperoleh dengan memakai  kateter. Kemasan yang sesuai untuk  pengiriman spesimen melalui pos juga dapat diberikan. Saat kematian terjadi di rumah sakit 

dan keracunan dicurigai, spesimen antemortem residual harus diperoleh sebagai dari  laboratorium patologi rumah sakit (tidak hanya patologi dan hematologi kimiawi, namun  juga  imunologi, obat transfusi, dan virologi mungkin sumber spesimen semacam itu. dan diajukan  untuk analisa  toksikologi selain spesimen postmortem. Perhatikan bahwa ketersediaan  spesimen ante atau peri-mortem tidak meniadakan kebutuhan untuk mengumpulkan 

spesimen postmortem..Semua specimen  organ dan jaringan, dan setiap botol tablet atau residu kejadian, harus  ditempatkan  di tempat  terpisah untuk menghindari mungkin  kontaminasi silang.  Sampling melalui jaringan yang mengandung konsentrasi analit tinggi memicu  kontaminasi specimen . Semua specimen  organ dan jaringan, dan setiap botol tablet atau residu pemandangan,  harus ditempatkan  di tempat  terpisah untuk menghindari mungkin  kontaminasi silang. 

Sampling melalui jaringan yang mengandung konsentrasi analit tinggi memicu    kontaminasi specimen . Integritas specimen  yaitu  perhatian utama bila  ada implikasi medicolegal sebab  bukti mungkin diperlukan di pengadilan. aksi  pencegahan untuk memastikan integritas specimen   meliputi: (i) pelabelan specimen  yang tepat, (ii) pemakaian tempat  anti-tamper, (iii)  pengumpulan specimen  seperti rambut, kuku, dan darah femoral sebelum aksi  otopsi, dan  (iv) dokumentasi yang tepat (dokumen chain of custody). specimen  yang dihimpun  untuk 

tujuan klinis (atau bahkan untuk petugas pemeriksa mayat) sering  bukan yaitu  bukti  yang baik, namun specimen  semacam itu mungkin yaitu  specimen  yang tersedia. Uji DNA  dapat dipakai  untuk menentukan asal specimen  yang mana  ada kekhawatiran pada  

integritas specimen .

--Tulang dan sumsum tulang

Sumsum tulang mungkin bermanfaat  dalam identifikasi racun di mana semua jaringan lunak 

sudah  mengeriput (pada korban yang sudah  dikubur). Untuk nortriptyline, rasio sumsum tulang: darah yaitu  30 sudah  ditunjukkan secara eksperimental sesudah  lima hari pengobatan  nortriptyline. Tulang bermanfaat  bila  dicurigai keracunan kronis oleh arsenik atau timbal 

--area  injeksi

area  suntikan yang mungkin harus dipotong, dikemas secara terpisah dan diberi label  area  asal bahan diambil. Bahan 'pengendalian ' yang sesuai (yaitu dari lokasi yang dianggap tidak  boleh menjadi area  suntikan) dari komposisi mirip  harus diberikan secara terpisah 

--Residu kejadian  

Bahan seperti sisa tablet, bubuk, jarum suntik, cairan infus, dan sebagainya, dapat  memberi  informasi berharga mengenai racun yang terlibat dalam sebuah insiden, dan  harus dikemas terpisah dari specimen  biologis. ini    perlu bila  senyawa volatil  terlibat. Semua barang harus diberi label dan dikemas dengan hati-hati. Residu kejadian  mungkin   berharga dalam kematian yang melibatkan personil medis, gigi, dokter 

hewan, atau perawat yang mungkin memiliki akses ke agen yang sulit untuk dideteksi begitu  mereka memasuki tubuh. Investigasi kematian yang terjadi selama atau segera sesudah   anestesi harus mencakup analisa  anestesi yang dipakai , termasuk anestesi inhalasi, untuk menyingkirkan kesalahan administrasi. Jarum harus dikemas dalam perisai yang sesuai untuk 

meminimalkan risiko cedera pada staf laboratorium dan staf lainnya 

--Darah (untuk pemeriksaan kuantitatif... 

Dalam toksikologi analitis, plasma atau serum biasanya dipakai  untuk pengujian  kuantitatif. Namun, beberapa racun seperti karbon monoksida, sianida dan banyak senyawa  organik volatil lainnya, timbal dan logam berat lainnya, dan beberapa obat, seperti 

chlortalidone, ditemukan terutama pada atau terikat dengan eritrosit dan maka   darah utuh hemolitik harus dipakai  untuk pengukuran semacam itu. Ruang di atas darah di dalam tabung (headspace...  harus diminimalkan bila  karbon monoksida, pelarut, atau bahan  volatil lainnya dicurigai. bila  specimen  sudah  dihimpun  dan disimpan dengan benar, biasanya tidak ada  perbedaan menonjol  dalam konsentrasi racun antara plasma dan serum. Namun, bila  senyawa 

tidak ditemukan sampai batas tertentu dalam eritrosit maka memakai  seluruh darah  utuh  menghasilkan sekitar dua kali lipat dari spesimen. Darah dengan antikoagulan  heparin atau EDTA akan menghasilkan darah utuh atau plasma yang sesuai. Obat-obat

immunosuppressive ciclosporin, sirolimus, dan tacrolimus yaitu  masalah  khusus sebab   resebaran  antara plasma dan eritrosit dimulai sesudah  specimen  dihimpun  dan pemakaian  seluruh darah hemolitik diindikasikan untuk pengukuran senyawa ini.

Untuk memaksimalkan keandalan pengukuran yang dilakukan pada darah postmortem,  disarankan  agar: (i) interval antara kematian dan pemeriksaan postmortem  diminimalkan, (ii) specimen  disimpan pada suhu 4oC sebelum pemeriksaan  atau  sesudah  

pengumpulan, (iii) darah dihimpun  dari dua lokasi perifer yang berbeda, lebih disukai vena  femoralis, sesudah  mengikat vena secara proksimal ke lokasi pengambilan specimen , dan (iv)  pengawet [2% (w  atau  v) fluorida] ditambahkan ke sebagian specimen  darah  atau  specimen  dari satu vena,  dan ke urine. Lokasi pengambilan specimen  darah yang tepat harus dicatat, juga waktu sampling  dan (perkiraan) waktu kematian bila  diketahui. bila  specimen  cukup diperoleh, ini harus dibagi antara tabung yang tidak diawetkan dan 

diawetkan (fluoride... , bila  seluruh specimen  harus diawetkan kecuali ada mungkin   keracunan dengan fluorida atau senyawa yang memicu  fluorida in vivo, seperti  fluoroasetat,

--Darah (untuk analisa  kualitatif... 

Darah postmortem (sekitar 20 mL) untuk analisa  kualitatif harus diambil dari jantung (sebaiknya atrium kanan), vena kava inferior, atau pembuluh darah besar lain yang mudah.  area  pengambilan specimen  yang tepat harus dicatat pada tabung sampe, darah harus bebas  mengalir. 

-- Urin

Urin bermanfaat  untuk 'uji penyaringan racun' (screening test) sebab  sering tersedia dalam volume besar dan mungkin mengandung konsentrasi obat atau racun lain yang lebih  tinggi, atau metabolitnya, dibandingkan  darah. Keberadaan metabolit kadang  membantu  identifikasi racun bila  metode  kromatografi dipakai . Spesimen 50 mL dari pasien  dewasa,  dihimpun  dalam tempat  steril yang disegel, cukup untuk sebagian besar tujuan. Tidak ada 

bahan pengawet yang harus ditambahkan. specimen  harus diperoleh segera sesudah  keracunan  dicurigai, idealnya sebelum ada terapi obat yang dimulai. Namun, beberapa obat, seperti antidepresan trisiklik (amitriptyline, imipramine.), memicu  retensi urin, dan 

spesimen yang   awal mungkin mengandung beberapa  obat yang tidak menonjol .  Sebaliknya, sedikit racun mungkin tertinggal dalam spesimen yang diambil berjam-jam atau  berhari-hari sesudah  terpapar meski pasien mungkin   sakit, contoh nya seperti pada 

keracunan parasetamol akut. Beberapa bakteri urin memiliki enzim yang mampu mengubah metabolit triptofan  menjadi zat yang berinteraksi dengan plastik kantong tempat  urin untuk menghasilkan 

indirubin (merah) dan nila (biru) yang memberi  warna ungu  atau  hitam yang intens.  Konsentrasi tinggi beberapa obat atau metabolit dapat memberi warna khas pada urin.  Racun berbau kuat seperti kamper, etchlorvynol, dan methylsalicylate kadang  dapat 

dikenali dalam urin sebab  diekskresi sebagian dalam bentuk tidak berubah. Aseton bisa  muncul  dari metabolisme 2-propanol. Terapi kronis dengan obat sulfa seperti  sulfonamide memicu   kristal kuning atau hijau  atau  coklat dalam urin netral atau alkali.  Phenytoin, primidone, dan sultiame memicu   kristal dalam urine sesudah  overdosis.  Ciri khas kristal tak berwarna kalsium oksalat dapat terbentuk pada pH netral sesudah  tertelan  etilena glikol, asam oksalat, atau oksalat yang larut dalam air. Fluoresensi urin mungkin sebab   fluorescein ditambahkan ke antibeku mobil (sering mengandung etilen glikol dan  atau  atau 

metanol) dan mungkin untuk produk lain untuk membantu deteksi kebocoran. Untuk pemeriksaan postmortem, bila  mungkin, specimen  urine 2 × 25 mL harus  dihimpun  dalam tempat  plastik steril, satu dengan pengawet (2%, w atau v fluorida). bila  hanya 

beberapa  kecil urin yang tersedia, semua harus diawetkan dengan fluorida (namun  lihat dokumentasi  

keracunan fluorida di atas) pada tabung plastik atau gelas 5 mL polos. Asam borat atau thiomersal [thimerosal; natrium 2- (etilmercuriothio) benzoat] tidak boleh dipakai  sebab  kontaminasi specimen  dengan borat dan merkuri. Spesimen urin yang dihimpun  postmortem   berharga dalam skrining untuk obat terutama obat terlarang, dan  sering dipakai  untuk analisa  etanol kuantitatif untuk menguatkan hasil analisa  darah 

--Isi lambung

Bilas lambung (gastric lavage...  jarang dilakukan saat ini dalam mengobati keracunan  akut. Namun, bila  specimen  isi perut diperoleh segera sesudah  episode keracunan, beberapa   besar racun mungkin ada sedang  metabolit biasanya tidak ada. Saat menyelidiki 

mungkin  keracunan, perlu untuk memperoleh  specimen  pertama dari cairan pembasah  sebab  specimen  lalu   mungkin   encer. Cuplikan specimen  (sekitar 50 mL) tanpa  bahan pengawet harus diambil untuk analisa . Namun, semua isi perut harus disimpan dan volume dicatat. bila  konsentrasi darah sulit ditafsirkan, terutama pada pemeriksaan 

postmortem, membantu  mengukur jumlah racun yang ada di lambung.Isi perut   bermanfaat  bila  racun yang tidak mudah diukur secara valid dalam darah, 

seperti sianida, sudah  dikonsumsi secara oral. Namun, perhatian besar diperlukan bila  garam  sianida atau fosfida, contoh nya aluminium fosfida, diperkirakan sudah  tertelan, terutama pada  saat perut kosong, sebab  gas sianida hidrogen atau fosfin yang   beracun dapat  dilepaskan sebab  reaksi dengan asam lambung. juga , adanya senyawa ini dan bahanbahan volatil lainnya memicu   kontaminasi silang spesimen biologis lainnya kecuali bila  aksi  pencegahan dilakukan,

--Cairan Vitreus 

Vitreous humor kadang dapat diperoleh bahkan bila  mayat sudah  terbakar atau rusak   , bila  pembusukan mulai terjadi, atau bila  specimen  seperti urine tidak tersedia.  Spesimen ini mungkin   bermanfaat  saat menyelidiki kematian terkait diabetes atau insulin, 

dan untuk analisa  alkohol, digoksin, litium, dan beberapa senyawa lainnya. Humor vitreous 

pada dasarnya yaitu  larutan garam dengan sedikit protein, dan maka  setiap  racun atau metabolit yang ada sering  dapat diekstraksi seolah-olah berada dalam larutan  buffer. specimen  harus dihimpun  dari masing-masing mata secara terpisah, dan pengawet 

sodium fluorida (2%, b atau v) ditambahkan. Perhatian harus diberikan selama pengambilan  specimen  sebab  penghisapan yang berlebihan memicu   perubahan konsentrasi  beberapa analit yang menonjol .

--Cairan sinovial

Cairan sinovial yang dihimpun  melalui aspirasi jarum sudah  dipakai , contoh nya  untuk menilai serapan obat peradangan nonsteroid ke area  aksi  yang mungkin terjadi. seperti  CSF dan humor vitreous, pengumpulan cairan sinovial juga dapat membantu  bila  terjadi kematian traumatis atau dekomposisi yang luas sebab  cairan ini dalam lingkungan  yang relatif terlindungi .

--Hati

Hati mudah diperoleh  postmortem dan mudah dihomogenisasi. Hati dapat mengandung  sebagian besar  obat dan metabolit, dan mungkin yaitu  spesimen utama yang  diajukan untuk analisa  bila  darah tidak tersedia. Sebagian (10-20 g...  jaringan hati yang tidak 

diolah (tidak diawetkan) harus dihimpun . specimen  harus diambil dari lobus kanan bila   memungkinkan untuk mengurangi risiko kontaminasi dengan empedu sebab  penyebaran  racun dari lambung mungkin terjadi pada lobus kiri. analisa  dengan specimen  hepar dapat 

membantu untuk menentukan apakah paparan akut atau kronis .

--Air liur  atau  cairan oral

walau  tidak biasanya dipertimbangkan dalam pekerjaan darurat klinis atau  postmortem, ada banyak alasan pengumpulan air liur atau cairan oral dari personal  yang hidup  sebab  pengumpulannya tidak invasif dan mencerminkan pemakaian obat atau alkohol saat  itu. Namun, pengumpulan air liur yang valid memerlukan  kerjasama dengan personal . 

Beberapa obat, keadaan  medis, atau kegelisahan, contoh nya, dapat menghambat sekresi air liur 

sehingga spesimen mungkin tidak tersedia dari semua personal  setiap saat. sebab  air liur  yaitu  cairan kental yang kurang mudah dituangkan atau dipipet dibandingkan plasma atau  urine, disarankan  pengenceran dengan buffer penyangga berair. bila  pengenceran dilakukan  dengan buffer, faktor pengenceran harus diperhitungkan dalam laporan kuantitatif.  Pengumpulan cairan oral untuk keperluan forensik memiliki keuntungan bahwa pengambilan 

specimen  dapat dilakukan sedang  donor diawasi, sehingga sulit untuk memalsukan atau mengganti spesimen. Kelenjar liur normal yang tidak distimulasi tidak mengeluarkan air liur. Namun, banyak rangsangan memicu air liur dan bahkan saat tidur biasanya ada stimulasi yang  cukup untuk memperoleh  aliran air liur yang   kecil (biasanya 0,05 mL per menit). 

Meludah biasanya cukup untuk memperoleh  aliran air liur sekitar 0,5 mL pr menit. walau   air liur dapat dihimpun  dari kelenjar parotid dengan canulasi saluran kelenjar,  pengumpulan air liur campuran secara keseluruhan biasanya yaitu  alternatif praktis.

Pada subyek yang sehat, cairan gyngival crevicular dapat membentuk hingga 0,5%  volume air liur campuran: proporsi ini meningkat secara nyata pada pasien radang gusi.  Eksudat plasma dari lecet mulut kecil mungkin juga berkontribusi. sebab  itu, subjek tidak  boleh menyikat gigi atau melakukan cara lain untuk kebersihan mulut selama beberapa jam 

sebelum air liur dihimpun . Mengunyah lilin parafin, Parafilm, karet gelang, atau permen karet biasanya memproduksi  aliran air liur 1-3 mL per menit. pemakaian tetes asam lemon atau beberap

tetes 0,5 mol atau L asam sitrat yaitu  salah satu strategi kimia yang diadopsi untuk merangsang 

aliran air liur. Air liur harus dibiarkan mengumpul di mulut sampai keinginan untuk menelan  terjadi sebelum dikeluarkan ke dalam bejana pengumpul. Merangsang aliran air liur   memudahkan koleksi volume yang relatif besar dalam waktu singkat. juga , pH air liur  yang distimulasi secara fisik sekitar 7,4 sedang  pH air liur yang tidak distimulasi  menandakan  variabilitas yang lebih besar yang mempengaruhi sekresi asam lemah dan  basa. Namun, setiap stimulus fisik atau kimia yang dipakai  selama pengumpulan tidak  boleh diserap atau merekayasa  senyawa yang  diukur, juga tidak memicu  faktor  yang mengganggu prosedur pengujian. Lilin parafin dan parafilm, contoh nya, dapat menyerap  molekul lipofilik yang   tinggi, dan pemakaian stimulan asam seperti asam sitrat dapat 

memicu  perubahan pH saliva yang mengubah tingkat sekresi senyawa yang  diionkan,

Alat pengumpul cairan liur  atau  oral

Pengumpulan specimen  cairan oral dapat memakai  gulungan Salivette (Sarstedt)  gulungan katun-gigi (poliester) yang dikunyah selama 30-45 detik dengan atau tanpa .rangsangan lebih lanjut. Perangkat ini tersedia dengan atau tanpa sitrat. Gulungan yang sudah  menyerap air liur ditempatkan  dalam tempat  dan ditutup dengan stopper plastik. tempat   disentrifugasi (3 menit, 1000 g...  di dalam tabung polistiren. Selama centrifugasi, air liur  berpindah dari gulungan katun gigi mengumpul ke bagian bawah tabung. Sisa-sisa seluler dan  lainnya ditahan di dasar tabung pada penampung kecil ,Keuntungan dari salivet yaitu  dapat menyerap volume air liur yang relatif besar (1,5  mL), walaupun ada kerugiannya yaitu  bahwa katun penyerap mengganggu beberapa tes,  seperti testosteron. Alat pengumpulan lainnya (OraSure...  hanya menyerap 1,0 mL.  Pengumpulkan cairan oral dapat memakai  bantalan yang ditempatkan  di antara pipi dan gusi

--Keringat

Pengumpulan keringat disarankan sebagai alat untuk menguji obat terlarang.  Keringat dapat dihimpun  sebab  cairan keringat atau tissu dahi dapat dipakai . Sebagai  alternatif, bantalan (patch) yang ditempel pada kulit bisa dipakai, pengumpulan  keringat yaitu  aksi  non-invasif dan tersedia alat secara komersial dapat  dipakai untuk waktu yang lama (10-14 hari atau lebih). Keringat dapat mendeteksi  pemakaian obat yang terjadi sesaat sebelum patch ditempelkan dan sedang  perangkat  tetap bersentuhan dengan kulit.

--Udara ekspirasi

Pengukuran konsentrasi zat volatil dalam udara yang dihembuskan (ekspirasi) oleh alat  inframerah atau perangkat lainnya perlu dalam pengujian di pinggir jalan untuk etanol dan  berharga dalam menilai paparan racun seperti karbon monoksida. MS langsung dari udara  yang dihembuskan juga dapat mendeteksi banyak senyawa termasuk senyawa volatil dan 

mungkin  anestesi intravena beberapa hari sesudah  pemakaian. Namun, pemakaian  metode  terbatas hanya dari subjek atau pasien yang masih hidup. juga , pengumpulan  udara yang dihembuskan ke kantong plastik impertif (Tedlar atau PTFe... , atau melalui alat 

khusus  dapat memfasilitasi beberapa  analisa  volatil dan metabolit melalui  analisa  GC atau GC-MS berikut.

--Cairan serebrospinal

Cairan serebrospinal (cerebrospinal fluid=CSf...  yang dihimpun  melalui aspirasi jarum  kadang dipakai  untuk menilai keterpaparan pada obat saraf pusat dan disarankan untuk analisa  mungkin  kesalahan pemberian obat. seperti  vitreous humor dan cairan sinovial, CSF   berada dalam  lingkungan yang relatif terlindungi, dan maka  juga dapat memberi  specimen  

berharga untuk pengukuran etanol contoh nya, bila  specimen  lain tidak tersedia.

-- Jaringan lainnya

specimen  jaringan lainnya mungkin bermanfaat  saat menyelidiki kematian yang mana  zat volatil 

seperti pelarut atau gas terlibat. Otak, lemak subkutan, paru-paru, limpa, dan ginjal yaitu yang paling bermanfaat ; 10-20 g berat basah jaringan yang tidak diolah harus dihimpun  ke  dalam tempat  terpisah. Spesimen harus ditempatkan  dalam toples spesimen atau tas nilon dan  dibekukan sebelum diangkut ke laboratorium, dengan hati-hati (tabung yang terlalu penuh dapat pecah saat dibekukan). Pengukuran konsentrasi racun tertentu dari otak mungkin bermanfaat  dalam masalah   tertentu, contoh nya kematian terkait kokain. Limpa kaya akan eritrosit dan sebab nya dapat memberi  spesimen alternatif yang berharga untuk mengukur saturasi karboksimoglobin 

bila  darah tidak tersedia .

-- Jaringan Keratin (rambut dan kuku)

Banyak ion logam, obat dan metabolitnya terikat pada rambut dan kuku saat terbentuk, dan tidak dimetabolisme lebih jauh. specimen  ini mungkin bermanfaat  bila  dugaan  paparan kronis, contoh nya kematian terkait dengan penyalahgunaan obat terlarang (khususnya  opiat dan metadon) yang mana  pemakaian obat baru-baru ini   perlu, dan untuk racun 

yang mungkin sudah  dieliminasi dari cairan dan jaringan specimen  yang umum lainnya  sebelumnya. Lidocaine, heroin dan kokain, sudah  dipantau di rambut. Rambut juga bisa  bertahan lebih lama sesudah  pemakaman dibandingkan  jaringan lain. bila  terpapar satu racun yang  dicurigai, namun racun yang dicurigai tidak terdeteksi dalam darah atau urin, menunggu 1-2  bulan agar rambut kepala tumbuh dan lalu  melakukan analisa  segmental dapat 

mengungkapkan adanya racun atau obat. Rambut kemaluan atau aksila dapat menggantikan 

bila  tidak ada rambut kepala yang tertinggal. 

Dalam pekerjaan postmortem, kuku utuh harus diangkat dari jari tangan atau kaki.  

ini memungkinkan untuk mendeteksi paparan dengan rentang waktu lebih panjang dibandingkan   rambut. Namun, relatif sedikit yang diketahui tentang mekanisme pengambilan dan retensi  atau obat dan metabolit pada kuku. juga , tingkat pertumbuhan kuku yang lebih  lambat, terutama kuku kaki, dibandingkan dengan rambut, sebab  itu interpretasinya lebih sulit.

Protokol untuk pengumpulan rambut kepala untuk pengujian obat ,antaralain :

-Ambil specimen  rambut (100-200 rambut), ikat dengan benang katun di ujung akar 

-Potong specimen  sedekat mungkin ke kulit kepala (2 mm), pastikan gunting sejajar  dengan kulit kepala

-Pegang specimen , selaraskan ujung akar yang dipotong dari specimen  dan tempatkan   dengan hati-hati di atas sepotong aluminium foil dengan ujung akar yang dipotong  sekitar 15 mm di luar ujung foil.

-Tandai ujung akar foil dan lipat foil di sekitar rambut dan lipat erat agar tetap pada  area nya

-Lipat foil lagi setengah memanjang

- tempatkan  specimen  dalam amplop tamper-proof, tutup rapat. 

- Lengkapi dan tandatangani formulir permintaan, pastikan donor juga memberi tanda  tangan. bila  diperlukan, buat dokumentasi  di lembar terpisah dan lampirkan dengan specimen .

--Pemberian Label

  label harus tertulis antara lain:

1. Nama pasien : 2. usia  : 3. Jenis Kelamin :

4. Alamat : 5. Tanggal pengambilan : 6. Lokasi pengambilan :  7. Jenis spesimen :.8. Jumlah spesimen : 9. Nama dan Paraf Petugas Pengambil spesimen :

Untuk pemeriksaan yang bersifat rahasia (Rhs) maka label cukup diberi kode.

Pedoman pembekuan specimen:

-Jangan membekukan darah utuh bila  plasma atau serum harus dianalisa 

- Pastikan pelabelan itu tahan air

-Pastikan tabung tertutup rapat dan terisi dengan baik, namun  jangan terlalu banyak mengisi  tabung, terutama tabung kaca

-Jangan terlalu lama untuk meminimalkan efek pengeringan beku

-. Simpanlah dokumentasi  isi freezer

- Simpanlah dokumentasi  suhu freezer yang terus-menerus 

-. Setting alarm bila  terjadi kegagalan freezer

--tempat  spesimen

Tertutup rapat (tutupnya berulir), bermulut lebar.

tempat  spesimen urin, serum, darah, cairan lambung, harus dari bahan yang tidak mudah pecah, seperti dari polietilen yang kuat, tidak bocor, bersih dan kering.

Bahan Pengawet

Bahan pengawet diperlukan bila  spesimen harus dirujuk ke laboratorium pemeriksaan yang lebih mampu dan berjarak cukup jauh, atau ke laboratorium lainnya untuk pemeriksaan konfirmasi. Cantumkan nama bahan pengawet

Penanganan Khusus Specimen  Toksikologi

Tujuan pemeriksaan toksikologi   dibagi dua yaitu untuk projustisia atau penyidikan  dan diagnostic atau terapi, yang mana  untuk projustisia, pemeriksaan harus dilakukan mengikuti .prosedur yang ketat sebab  implikasinya dalam pengadilan.

Pedoman  Penanganan   Barang Bukti untuk Penyidikan

1. Persyaratan penerimaan barang bukti

a. Persyaratan administrasi

surat permintaan pemeriksaan dari penyidik polisi atau dari dokter forensik (tanggal dari LP sampai permintaan tidak lebih dari tujuh hari dan tanda tangan penyidik  minimal Kanit atau Kepala Unit) bila  berita acara penyitaan lebih dari satu maka surat 

permintaan harus ada dan sesuai untuk masing-masing barang bukti, sesuai nama.

 laporan polisi dari satuan kepolisian yang menangani masalah  secara terinci, tidak ada  coretan, stempel asli.

berita acara penyitaan barang bukti, stempel asli

berita acara penyisihan (penyisihan sebagian barang bukti yang dikirim ke laboratorium) dan pengambilan barang bukti, berita acara pembungkusan harus sesuai dengan barang bukti yang dikirim dan penyegelan barang bukti dari penyidik

 berita acara penahanan (asli, ditandatangani oleh tersangka),laporan kemajuan dilengkapi bila barang bukti berupa cairan tubuh, berita acara pengambilan specimen  urine atau darah .

b. persyaratan teknis

Pengambilan barang bukti (Bb...  bukan cairan tubuh :

barang bukti sesuai rincian tercantum berita acara pembungkusan  atau  penyegelan.

Bila berupa tempat  sediaan farmasi (botol, vial, usahakan yang masih ada sisaobat jangan dibuang... 

Bila berupa peralatan medis atau bahan-bahan sisa pemakaian (spuit, sisapuntung rokok, abu rokok), BB dihimpun  secara terpisah.

Bila berupa sediaan Farmasi (tablet, kapsul, ampul), maka BB digolongkan 

berupa tanaman lengkap atau bagian dari tanaman (daun, bunga, biji), semua  dikirim ke laboratorium

sesuai dengan bentuk sediaan dan sesuai dengan nama obat, Bila berupa larutan dari satu tempat , bila  memungkinkan pipet,10 mL specimen  untuk pemeriksaan; bila dari beberapa tempat , kelompokkan

berdasar  nomor lot atau karakteristik yang sama, 

Tata cara pengambilan specimen  :

 Barang bukti cairan tubuh :

Pengambilan urin minimal 50 mL dalam 1 botol dan langsung disimpan dalam kulkas (4ºc...  sedang  untuk specimen  darah paling sedikit 10 mL atau serum 5 mL

untuk setiap jenis pemeriksaan. Urin ditampung dalam pot urin disposible dari bahan yang tidak mudah pecah 

dan tidak bereaksi dengan specimen  urine  atau  inert, hindari tempat  plastik dan tutup karet sebab  senyawa non polar mudah diserap   oleh bahan itu . specimen  darah dalam tube diberi anti koagulan atau  Na-sitrat tempat  area  spesimen harus tertutup baik, tersegel dan pastikan tidak bocor. Beri label yang harus menempel pada tempat  urine tidak pada tutupnya dan 

pastikan integritas specimen .Label berisikan informasi paling sedikit meliputi:Nama :,Register barang bukti :

Tanggal dan waktu pengambilan specimen  : ,

Nama petugas pendamping pengambilan specimen  atau supervise :,Jenis specimen  :,Pengambilan specimen  harus di supervisi dan disaksikan oleh petugas yang  berwenang dan  terlatih.Fasilitas kamar mandi atau WC untuk tujuan pengambilan urin harus sudah disediakan  sebelum pengambilan urin

Ruangan untuk pengambilan specimen  terutama urin harus diperiksa apakah ada  zat atau barang yang mengurangi validitas hasil pemeriksaan. Hasil

yang tidak tepat juga dimungkinkan bila ada penambahan zat-zat tertentu pada  specimen  contoh nya dengan menambahkan cuka, asam askorbat, jus lemon atau jeruk  nipis, deterjen atau  sabun, garam dapur, tetes mata atau hidung, pemanis (sakarin), 

pemutih pakaian; atau juga dengan cara minum banyak, pemakaian diuretik, penambahan air pada specimen  atau mengganti dengan specimen  lain.

Pengemasan barang bukti:

Permintaan pemeriksaan untuk mendukung penyidikan harus diajukan oleh  penyidik dari instansi yang berwenang. Yang dimaksud dengan instansi yang berwenang yaitu  : polisi ,POM tentara,

Barang Bukti (Bb...  dikemas dalam tempat  yang baik, tidak bocor dan tersusun rapidan  dibungkus dengan baik dan berlak segel. Label specimen  harus dipasang di tempat  bukan di tutup tempat  specimen . Ini akan mencegah perubahan atau penukaran label secara 

sengaja atau tidak.Format permintaan pemeriksaan penyidikan dapat dilihat pada Lampiran 1. 

 Pengiriman barang bukti :, Darah dan urin: jangka waktu sesudah  pengambilan specimen  darah atau urin sampai  dengan diterima di laboratorium harus  tidak melebihi 24 jam, specimen  disimpan dalam suhu dingin  atau  0ºC atau dalam termos dingin yang diberi ice pack selama  pengiriman.,Penanganan Barang Bukti Di Laboratorium (Pra analisa ),Petugas laboratorium yang menerima barang bukti yaitu  petugas yang ditunjuk khusus dan sudah  mengerti prosedur penerimaan barang bukti, Pengecekan persyaratan penerimaan barang bukti (persyaratan teknis dan

administrasi), Registrasi barang bukti, Dokumentasi barang bukti (foto), sebelum dan sesudah barang bukti dibuka pembungkusnya, Simpan barang bukti di dalam lemari pendingin (freezer), bila   analisa  tertunda 

belum sempat dianalisa  segera.Penyisihan barang bukti sebelum dilakukan analisa  ,analisa  barang bukti

. Interpretasi hasil analisa , memicu  berita acara pemeriksaan laboratorium kriminalistik.  Semua petugas yang berkaitan dengan pengambilan, pengiriman dan terutama pemeriksaan specimen  harus mengetahui dan mentaati prosedur keamanan kerja 

seperti pemakaian sarung tangan dan alat perlindungan diri lain terutama dengan adanya penyakit seperti hepatitis dan AIDS.,Dikembalikan kepada Polisi  yang meminta pemeriksaan: Dalam keadaan tertutup dan disegel, bila  akan dibuka segelnya harus ada 2 (dua...   saksi.specimen  yang diperlukan  : Darah beku (diambil serumnya : 10 - 20 cc,Urin : 50 cc,Bilasan lambung : 500 cc pertama,Muntahan atau isi lambung : semua,

bila  waktu sejak asupan zat toksik sampai pasien diperiksa dokter atau tenaga medis kurang dari 4 jam, specimen  yang disarankan  untuk diperiksa yaitu  isi perut, muntahan, dan cairan lambung. specimen  harus diletakkan pada area  yang bersih, tertutup rapat dan

diberi label. bila  diminta dilakukan   cito   analisa , label, formulir permintaan, lembar informasi harus  menandakan  kepada siapa laporan ditujukan dan bagaimana menghubunginya secara  cepat bila laporan hasil pemeriksaan sudah  selesai dikerjakan.

Permintaan pemeriksaan laboratorium untuk diagnosa dan terapiseperti darah, urin dan bilasan lambung harus diajukan oleh dokter di rumah sakit atau praktek swasta. Surat  permintaan pemeriksaan laboratorium diharapkan dapat menyebutkan bahan yang dicurigai; antara lain dengan memperhatikan anamnesa atau riwayat keracunan, gejala  keracunan dan bahan toksis yang berada di sekitar korban. Laporan pemeriksaan pada Permintaan Keperluan   Diagnosa Terapi   

Dikembalikan kepada dokter yang meminta pemeriksaan , Tujuan tambahan dari preparasi specimen  dapat menghilangkan residu yang tidak larut 

dan senyawa yang mengganggu, dan kadang konsentrasi atau bahkan pengenceran  analit untuk menyesuaikan peka. Pilihan ekstraksi pelarut yang bijaksana, termasuk  ekstraksi balik terkendali   pH dari elektrolit lemah menjadi larutan berair, kadang 

diikuti dengan ekstraksi ulang ke dalam pelarut, dapat memperbaiki selektivitas dan  peka.  Metode yang dipilih untuk persiapan specimen  tergantung pada keseluruhan strategi  analisa . bila  analit itu labil secara termal maka GC biasanya tidak tepat, sebab  memakai  penguapan pelarut ekstraksi pada suhu tinggi. bila  konsentrasi analit tinggi, atau pengujian 

tertentu   sensitif, maka persiapan specimen  mungkin minimal. Di sisi lain, analisa  jejak  mungkin memerlukan suatu prosedur pengujian kompleks dengan beberapa konsentrasi dan langkah pembersihan. Urin dan empedu mungkin mengandung konsentrasi senyawa yang  lebih tinggi dan lebih sedikit residu yang tidak larut dibandingkan  darah utuh, plasma atau serum,  dan sebagai hasilnya persiapan specimen  kadang  disederhanakan.   preparasi 

specimen  disesuaikan dengan tujuan. Metode apapun diplih semudah mungkin secara teknis,  tidak hanya untuk meminimalkan biaya, namun  juga untuk memaksimalkan validitas dan  reproduksibilitas ,

Metode persiapan specimen :

--Presipitasi protein

Presipitasi protein plasma dengan analisa  supernatan yang dihasilkan sesudah   sentrifugasi ,, prosedur yang 

dipakai  diturunkan dari metode preparasi specimen  yang dipakai  sebelum  spektrofotometri UV. Pada beberapa masalah  supernatan dianalisa  secara langsung dengan HPLC atau oleh LC-MS. mungkin  hilangnya analit dengan presipitat   dipertimbangkan.

Berbagai prosedur pelepasan protein antara lain campuran larutan seng sulfat (5% b atau v): 

metanol (100 + 43), asam 5-sulfosalicylic (3,2% b atau v) dalam air: metanol (1 + 1) dan metanol: 

asetonitril (1 + 5 ). bila  reagen asam kuat dipakai , analit dan standar internal harus stabil 

pada nilai pH rendah. Pendinginan singkat sampai -20oC sebelum sentrifugasi   meningkatkan presipitasi protein. Metanol yang mengandung 0,2% (v atau v) asam klorida pekat  (2 volume...  bila ditambahkan ke plasma atau serum (1 volume...  diikuti dengan vortex-mixing  dan sentrifugasi berkecepatan tinggi (10.000 g atau lebih, 30 s) memberi  presipitasi  protein yang efisien. 

--Mikrodifusi yaitu  pemurnian specimen  yang bergantung pada  pembebasan senyawa yang mudah menguap, contoh nya hidrogen sianida. Larutan uji yang  dimasukkan dalam satu kompartemen sistem tertutup, senyawa yang menguap (volatile...   lalu   'ditangkap' memakai  pereaksi yang sesuai (larutan natrium hidroksida dalam  masalah  higrogen sianida... yang disimpan di kompartemen terpisah dari peralatan Conway yang  dibuat khusus ,Sel biasanya dibiarkan selama 2-5 jam (suhu kamar) agar proses difusi selesai, namun  kadang waktu inkubasi yang lebih pendek dapat dipakai . Konsentrasi analit  lalu  diukur dalam sebagian larutan 'perangkap' baik secara spektrofotometri, atau  dengan perbandingan visual dengan larutan standar yang dianalisa  secara bersamaan pada  sel terpisah. Aparatus Conway dapat dibuat dari kaca, namun polikarbonat bisa dipakai  

dengan fluorida sebagai kaca etsa hidrogen fluorida. Dengan sedikit mengolesi penutup  dengan parafin atau minyak silikon, pastikan segel kedap udara. Untuk melakukan uji  kuantitatif setidaknya diperlukan  delapan sel: blanko, minimal tiga kalibrator, specimen  uji  (duplo) dan specimen  pengendalian  positif (duplo). 

-- Hidrolisis metabolit terkonjugasi

Pelepasan konjugasi yaitu  langkah perlu dalam analisa  toksikologi, terutama  urin. Banyak obat dan metabolit (contoh nya benzodiazepin, obat pencahar, opiat dan steroid...   diekskresikan dalam urin dan dalam empedu terutama sebagai konjugat dengan asam Dglukuronat atau dengan sulfat, atau kadang keduanya. sedang  konjugat sulfat  yaitu  senyawa ester, glukuronida dapat berupa eter (aseton), ester (asil), atau N - atau Sglukuronida. (Silahkan dibaca  tentang biotransformasi atau metabolism xenobiotic... . 

Untuk memaksimalkan peka dalam skrining obat  atau  racun, dan bila  perlu, untuk  mengukur konjugat itu  secara tidak langsung, yaitu bersamaan dengan pengukuran  analit yang tidak terkonjugasi, hidrolisis selektif atau tidak selektif specimen  dapat dilakukan 

sebelum pengolahan specimen  lebih lanjut.

Inkubasi dengan asam mineral kuat, seperti volume yang sama dengan 5 mol atau L asam  klorida (15-30 menit, 100◦C pada tekanan atmosfir, atau dalam oven microwave atau pressure  cooker), murah dan memberi  hidrolisis konjugasi yang cepat namun tidak selektif. 

pemakaian microwave rumah tangga berpotensi berbahaya, namun tersedia instrumen  komersial yang menawarkan pengendalian  suhu. Inkubasi dengan enzim glucuronidase (EC 3.2.1.31) dan atau atau aril sulfatase (EC 3.1.6.1)  (15 jam, 35oc...  dapat memberi  hidrolisis selektif konjugat dalam keadaan  yang relatif lunak.

--metode  preparasi

Tekik preparasi specimen  toksikologi yang dipilih bergantung pada jenis specimen  dan tujuan  pengujian. 

---specimen  berbentuk serbuk atau tablet

Satu tablet specimen  (50 mg serbuk) larutkan dalam 10 mL metanol, bila perlu saring.

---specimen  Ganja

Tanaman ganja (Cannabis plant, Cannabis herba)

Lebih kurang 400 mg cuplikan yang sudah  diserbuk haluskan, masukkan ke dalam  Erlenmeyer bertutup, tambahkan 10 ml petroleum eter atau toluen, dan kocok 

selama 1 jam, lalu  saring. Bila perlu tambahkan lagi pelarut hingga diperoleh volume 10 ml

---Damar ganja (Cannabis resin)

Lebih kurang 100 mg damar ganja dalam mortir, gerus dengan ± 2 ml toluen sampai  terbentuk pasta. Dengan bantuan 8 ml toluen masukkan ke dalam Erlenmeyer

bertutup, kocok selama 1 jam dan saring.

--- Hasis (Hasis oil, Cannabis oil)

Lebih kurang 50 mg hasis larutkan dalam 10 ml toluen.

 specimen  cuplikan berbentuk cairan,Ambil minimal 10 mL cairan, tanpa penambahan zat lain., Spesimen darah atau serum atau plasma

Persiapan spesimen darah atau serum atau plasma dengan cara ekstraksi yaitu  ,antaralain : 

Pemeriksaan fraksi-fraksi dengan metode pemeriksaan KLT,Ekstraksi urin atau cairan lambung, Ekstraksi darah atau serum atau plasma,Ekstraksi darah atau serum atau plasma,Pemisahan atau isolasi specimen dengan pelarut organic pada pH tertentu dari zat-zat yang 

mengganggu berdasar  dengan kelarutannya. Hasil ekstraksi disaring dan  dikeringkan sehingga diperoleh  residu yang dianalisa.

 Peralatan : Vortex mixer,Shaker,Sentrifus,Tapered tube,

Reagen,Sonikator,Corong pisah,Corong, pengaduk,Penangas air,Pelarut organic (CHCl3),Natrium Sulfat Asam Sulfat pekat,Anhidrat,Natrium Hidroksida

Cara Kerja :

Ke dalam 4 ml specimen tambahkan 2 ml Buffer Fosfat (pH 7,4) dan 40 ml  Kloroform (CHCl3) kocok, lalu  tambahkan 2 gram Na2SO3 anhidrat kocok  kembali untuk menghasilkan masa yang padat. Tuangkan CHCl3 melalui saringan,Ektraksi kembali masa padat itu  dalam 20 ml CHCl3, campur kedua hasil ,ekstraksi fraksi CHCl3. Simpan masa padat yang ada,

bila   ada  Salisilat I fraksi CHCl3 diekstraksi dengan NaHCO3 untuk  menghilangkan Salisilat yang menghambat penentuan lalu   Pada fraksi CHCl3, tambahkan 8 ml NaOH 0,45 M (setara dengan 2 kali volume  specimen yang diambil), Kocok selama 2 menit kemudia sentrifus. Larutan NaOH mungkin mengandung barbiturat dan senyawa asam lemah lainnya. (Fraksi b...  , Cuci fraksi CHCl3 dengan sedikit air, buang air cucian, keringkan fraksi CHCl3  dengan Na2SO4 anhidrat, uapkan sampai kering. Residu mungkin  mengandung obat-obat netral dan beberapa obat yang bereaksi basa (Fraksi c...   seperti Klordiaepoksid, Diazepam dan Nitrazepam, bila   specimen masih ada, basakan dengan larutan ammonia, lalu ekstraksi 2 kali, masing-masing dengan 10ml CHCl3, lalu  keringkan dengan Na2SO4

anhidrat. Uapkan larutan sampai kering., Residu mungkin  mengandung obat golongan basa (Fraksi d... Ekstraksi urin atau cairan lambung 

Pemisahan atau isolasi spesimen dengan pelarut organik pada pH tertentu dari zat-zat yang  mengganggu, hasil ekstraksi disaring dan di keringkan sehingga diperoleh  residu yang  dapat dianalisa. Peralatan : batang, pengaduk, penangas air,vortex mixer, shaker, sentrifus, tapered tube, corong pisah, corong,  Reagen, Pelarut organik (Eter),Natrium Sulfat Anhidrat,Natrium Hidroksida, Asam Sulfat pekat

 Cara Kerja: 

 Tambah 10 ml urin dengan asam phosphate dan asam tartrat untuk memicu  pH 3,Ekstraksi 2 kali masing-masing dengan 30 ml eter, campur hasil ekstraksi

Cuci dengan 5 ml air dan tambahkan air cucian ke dalam specimen Simpan fraksi air untuk ektraksi lalu  

 Fraksi eter diatas diekstraksikan dengan 5 ml larutan Natrium Bikarbonat,Fraksi eter diesktraksi kembali dengan 5 ml NaOH 0,45 N dan simpan sebagian hasil 

ekstraksi untuk pemeriksaan barbiturate dan beberapa substansi asam lemah  lainnya, contoh nya Klordiazepoksid (Fraksi b...  

Sebagian lain dari fraksi eter diatas dicuci kembali dengan air, saring hasil cucian  dan tambahkan dengan Na2SO4 anhidrat, uapkan sampai kering.  Residu mungkin  mengandung obat netral (Fraksi c... Fraksi air pada butir 3 ditambah dengan ammonia untuk memicu  pH 8  ,Ekstraksi sebanyak 2 kali masing-masing dengan 10ml CHCl3.Cuci campuran ekstrak fraksi dengan air, lalu  saring dan tambahkan  dengan sedikit asam tartrat untuk menghindari hilangnya zat-zat yang mudah 

menguap. , Uapkan sampai kering, residu mungkin  mengandung antara lain golongan  Benzodiazepin: Klordiazepoksid, Diazepam, Nitrozepam (Fraksi d... .

Ekstraksi cairan lambung dilakukan seperti ekstraksi pada urin dengan  tambahan cara kerja specimen yang  diekstraksi ,antaralain :  tambahkan ke  dalam specimen ammonium sulfat (padat berlebihan) bersama-sama dengan beberapa tetes asam phosphate 10%, panaskan, kocok dan saring. Filtrat dilakukan 

seperti cara kerja di bawah ini ,

"specimen  Rambut"

Dekontaminasi dengan pelarut organic:

Ambil untai rambut (~ 100 mg... ., Cuci dengan 5 ml diklorometana selama 2 menit., Keringkan dengan kertas adsorben.,Cuci kembali dalam 5 ml diklorometana selama 2 menit.,Keringkan lagi

--Prosedur dengan pelarut berair

Ambil untai rambut (~ 100 mg... , Cuci dengan 10 ml SDS 0,1% dalam air (b  atau  v) selama 3 menit., Bilas dua kali dengan 10 ml air selama 3 menit., Bilas dengan 10 ml aseton selama 3 menit., Keringkan dalam oven pada suhu 60 ° C selama 30 menit, 

--Preparasi

Langkah pertama yaitu  homogenisasi dengan memotong rambut menjadi potongan  1-3 mm atau dengan grinder. Untuk memastikan homogenitas specimen , disarankan  agar memakai  setidaknya 20-30 mg rambut. Hindari kontaminasi gunting...  dan 

harus dipakai  botol sekali pakai. Senyawa yang ada  dalam matriks rambut  dapat dilarutkan dengan memakai  berbagai metode ekstraksi, yang efisiensi dan 

selektivitasnya harus sesuai dengan karakteristik obat target dan metode  analisa .  Ekstraksi dengan metanol

Metanol melarutkan senyawa lipofilik netral, dan hidrofilik sedang; sebab   sifatnya yang hidrofilik, ia menembus rambut, menghasilkan pembengkakan matriks  dan pembebasan obat-obatan. Sonikasi specimen  dalam bak mandi ultrasonik meningkatkan proses ekstraksi.Keuntungan cara ini yaitu : 

efektif pada  senyawa hidrofilik dan lipofilik, prosedur ini "ringan" pada  senyawa yang tidak stabil yang mudah mengalami hidrolisis (contoh nya heroin 

dan kokain).,Hampir semua obat dapat diekstraksi dengan methanol, Injeksi langsung ekstrak pada GC-MS atau LC-MS dimungkinkan bila konsentrasi ,

obat cukup tinggi,Campuran asam organik metanol  atau  berair sudah  terbukti memperbesar panel 

obat yang diekstraksi secara efisien.

Kekurangan:

Pemulihan obat yang diionkan tidak lengkap dan lebih rendah dibandingkan  prosedur ekstraksi lainnya.

 Ekstrak metanol sering menggabungkan zat yang mengganggu, dan prosedur  pembersihan (seperti ekstraksi fase cair  atau  cair atau padat) disarankan  dalam  pemakaian rutin.Ekstraksi dengan larutan asam atau larutan buffer Inkubasi pada HCl berair 0,01-0,50 M atau buffer fosfat M pada pH 6,4-7,6  biasanya dilakukan pada suhu 56°C atau 60°C dalam semalam. Bila diperlukan  (contoh nya untuk menyingkirkan kontaminasi eksternal), morfin glukuronida, yang  yaitu  fraksi minor dari morfin total, dapat ditentukan dengan membandingkan  konsentrasi morfin sebelum dan sesudah perlakuan dengan glukuronidase  atau  

arilulfatase. Keuntungan:obat dasar diekstraksi dengan efisien. Ekstraknya   lebih bersih dibandingkan  ekstrak metanol.

 Kekurangan:

Konversi heroin (diacetylmorphine...  menjadi 6-monoacetylmorphine (6-MAM);

Hidrolisis molekul berikut sudah  dilaporkan:

konversi parsial kokain menjadi benzoylecgonine;

Hidrolisis 6-MAM menjadi morfin.

Digesti dalam NaOH encer

Larutan 1 M NaOH ditambahkan pada specimen  rambut dan inkubasi selama satu  jam pada 80°C, atau semalam pada suhu 60°C. Hanya cocok untuk obat yang  stabil dalam keadaan  basa.

Kelebihan: Dapat dipakai  dalam kombinasi dengan mikropengendalian er fase padat headspace 

(HS-SPMe...  untuk mendeteksi senyawa semi-volatile (contoh nya turunan amphetamine, anestetik lokal, barbiturat, diphenhydramine, ketamin, metadon, 

phencyclidine, phenothiazines, tramadol, dan antidepresan trisiklik).Sesuai terutama nikotin, amfetamin dan beberapa neuroleptik. efektif untuk pemulihan kuantitatif, Dapat bermanfaat  untuk mendeteksi obat yang konsentrasinya   rendah 

seperti metabolit cannabinoids.

 Kekurangan : Pelarutan matriks rambut secara parsial atau lengkap menghasilkan larutan  "kotor" yang memerlukan  pembersihan (clean up) sebelum analisa  instrumental , Tidak sesuai untuk obat yang tidak stabil dalam keadaan  basa (contoh nya  kokain, benzodiazepin).

Metode test warna 

yaitu  metode lama namun  masih dapat dipakai  sebagai uji pendahuluan untuk specimen  , berupa cuplikan serbuk, tablet atau bentuk sediaan obat lain terutama obat-obat yang  sering disalahgunakan. sedang  metode KLT dapat dipakai  sebagai metode pemisahan  atau sebagai metode konfirmasi. bila   digabungkan dengan Densitometri maka metode KLT 

bisa dipakai  untuk kuantitasi.

a. TES WARNA 

Tes warna ( dinamakan  tes kimia... dipakai  oleh ahli toksikologi dan analis  obat sebagai salah satu cara pertama untuk identifikasi obat dan racun. Tes 

warna ini paling banyak dipakai  untuk obat dan residu, dan  cairan biologis seperti  isi perut, dan urin. Tes ini dipakai  untuk menempatkan senyawa yang tidak diketahui ke  dalam kelas senyawa tertentu. Tes warna ini tetap populer sebab  berbagai alasan, mudah 

dilakukan, pemakaian reagen minimal, murah dan memberi hasil yang bisa dilihat dengan  mata telanjang (tidak memerlukan alat khusus). Beberapa tes juga dapat dipakai  sebagai  penanda bercak kromatografi lapis tipis (KLT). Pereaksi diterapkan  dengan cara 

menyemprot atau mencelupkan  analisa  kualitatif dari specimen  biologik akan memberi  informasi apakah subyek yang  bersangkutan memakai  obat terlarang atau tidak. Adanya metabolit menandakan   zat atau obat itu  sudah  dikonsumsi dan termetabolisme dalam tubuh. Pemeriksaan skrining positif berarti suatu obat atau metabolitnya ada  dalam urin  sebanyak atau lebih banyak dari batas deteksi. Ekskresi dari tubuh dan konsentrasinya dalam  urin bergantung pada faktor ,antaralain :  cara pemakaian, lama dan seringnya 

pemakaian, fungsi organ, kecepatan metabolisme obat, keadaan  fisik dari subyek, usia , jenis  kelamin, waktu pengambilan specimen , pengenceran ,

Pemeriksaan screening hanya untuk mengarahkan mungkin  jenis zat yang ada   dalam specimen , sehingga hasilnya harus dilanjutkan dengan tes konfirmasi sebab  zat selain narkoba juga berpotensi mungkin  memberi  hasil yang sama , Untuk 

golongan benzodiazepin reaksi warna tidak disarankan  untuk dipakai sebab  jenis zat  dalam golongan ini   beragam, pemeriksaan skrining yang disarankan  yaitu 

kromatografi lapis tipis (KLT). Zat yang dipakai  untuk pereaksi harus dijaga mutunya untuk menjamin bahwa zat yang dipakai  tidak mengalami dekomposisi, yang 

merubah warnanya dan mengacaukan hasil pemeriksaan. Banyak obat dan racun lainnya memberi  warna khas dengan pereaksi yang  sesuai bila  ada dalam jumlah yang cukup, dan bila  tidak ada senyawa yang mengganggu.  Beberapa dari tes ini, untuk  praktis,  , namun  biasanya senyawa yang mengandung 

gugus fungsi yang mirip  juga akan bereaksi. Kelemahan lainnya yaitu  bahwa deskripsi 

warna   subjektif, bahkan pada pasien  dengan penglihatan warna normal, sedang  warna yang dihasilkan biasanya bervariasi dalam intensitas atau rona dan mungkin tidak stabil. Hasil tes sebaiknya didokumentasikan dengan fotografi,

Tes warna memiliki kelebihan dan kekurangan ,antaralain :  

-Harus selalu menganalisa banko reagen dan pengendalian  positif dengan specimen 

-Bersifat subjektif, pasien  berbeda dalam cara mereka memandang atau mendeskripsikan  warna, warna juga bervariasi intensitasnya,Banyak jenis tes yang tersedia, namun sebagian besar memiliki selektivitas yang buruk

-cepat dan murah, hanya menambahkan reagen lalu  amati warna yang  terbentuk- Terutama bermanfaat  untuk urine atau cairan lambung atau   residu kejadian  , contoh nya  tablet atau serbuk

-Biasanya dilakukan dengan tabung reaksi bening, namun  plat tetes putih lebih baik (latar belakang seragam, sedikit memakai  reagen).

Reagen untuk uji warna ini biasanya mengandung asam kuat atau alkali atau  memakai  bahan kimia organik yang berpotensi berbahaya. aksi  pencegahan 

keselamatan yang tepat harus diperhatikan. Banyak tes dapat dilakukan dengan memuaskan  dalam tabung reaksi kaca bening. Namun, pemakaian plat tetes (plat porselen putih  mengkilap dengan beberapa  susia  dangkal di permukaannya... memberi latar belakang 

seragam untuk menilai setiap warna yang dihasilkan dan juga meminimalkan volume reagen  dan specimen  yang dipakai .  saat melakukan tes warna, perlu untuk selalu melakukan analisa  secara bersamaan dengan 

specimen  uji, yaitu:

specimen  positif yang mengandung analit dengan konsentrasi yang diketahui. bila  tes  dilakukan pada urine, idealnya urin dari pasien atau sukarelawan yang diketahui sudah   memakai  senyawa yang bersangkutan harus dipakai . Namun, ini  tidak selalu 

praktis dan lalu  urin 'spiked' (blanko urin yang sudah  ditambahkan beberapa  senyawa  yang diketahui dalam analisa ) harus dipakai .

Tes blanko specimen , yaitu  specimen  yang diketahui tidak mengandung senyawa yang diuji. 

bila  tes dilakukan pada urin maka blanko urin (bebas analit) harus dipakai , atau dapat dipakai  akuades.

Tes warna bermanfaat  sebab  minimal peralatan dan keahlian yang diperlukan, namun  reagen harus stabil. Tes ini pekanya terbatas dan biasanya hanya berlaku untuk urin dan  atau specimen  lain yang mengandung jumlah racun dalam jumlah relatif besar, seperti isi perut.  yaitu  mungkin untuk mengekstrak racun dan menerapkan tes warna pada residu, walau   ini  jarang dilakukan untuk cairan biologis. Negatif palsu yaitu  risiko bahkan saat  tes  dipakai  untuk tujuan yang dimaksudkan dalam specimen  yang sesuai. Hasil positif racun  seperti parasetamol atau paraquat berfungsi untuk menandakan  perlunya pengukuran kuantitatif dalam plasma. Reagen yang sama ini dapat dipakai  sebagai pereaksi warna  untuk penentu bercak pada KLT dan beberapa sudah  dikembangkan untuk dipakai  dalam  pengukuran kuantitatif .

1. Metode Marquis

a. Prinsip: Pembentukan senyawa berwarna antara zat yang diperiksa dengan formaldehid dalam  suasana asam sulfat pekat

b. Alat : Plate tetes, Pipet,Vortex mixder,Sentrifus,

c. Reagen : Pereaksi Marquis (Formaldehid 34-38% dan asam sulfat pekat 1:9 v atau v),Eter,Natrium hidroksida (NaOH) 4N , Etanol 95%

d. Cara Kerja untuk specimen  urin: Masukkan 2 ml urin kedalam tabung sentrifus,Tambahkan NaOH 4N sampai pH 9-10, Ekstraksi dengan 5 ml eter, masukkan dalam vortex mixer dan di sentrifus, Ekstrak eter dipisahkan dan diuapkan sampai kering ,Residu dilarutkan dalam 1 ml etanol 95% (secukupnya), keringkan lagi, Tambahkan 1 tetes larutan perekasi, Untuk pemeriksaan specimen  obat atau makanan yang dicurigai ,Letakkan 1-2 mg specimen  bubuk atau 1-2 tetes bila berbentuk cairan ke dalam lekukan 

plat tetes, tambahkan pereaksi, tak lebih dari 3 tetes.

2. Metode Mecke

a. Prinsip:Pembentukan senyawa berwarna antara zat yang diperiksa dengan asam selenius  dalam suasana asam sulfat pekat

b. Alat : pipet tetes, pipet, vortex mixer (untuk urin), sentrifus(untuk urin)

c. Reagen: Pereaksi Mecke: 0,25 gram asam selenium larutkan dalam 25 mL asam sulfat pekat panas ,

Eter (untuk urin),Natrium hidroksida (NaOH) 4 N (untuk urin), Etanol 95 % (untuk urin),

d. Cara kerja:Lihat Metode Marquis

e. Pembacaan Hasil:Lihat Metode Marquis

3. Metode Frohde

a. Prinsip:Pembentukan senyawa berwarna antara zat yang diperiksa dengan asam molibdat atau natrium molibdat dalam suasana asam sulfat pekat

b. Alat : pipet tetes, pipet, vortex mixer (untuk urin), sentrifus(untuk urin)

c. Reagen -- Pereaksi Frohde :

1,0 gram asam molibdat atau natrium molibdat larutkan dalam 100 mL asam sulfat pekat panas, larutan akhir harus tak berwarna,Eter (untuk urin)

Natrium hidroksida (NaOH) 4 N (untuk urin), Etanol 95 % (untuk urin).

d. Cara Kerja:Lihat Metode Marquis

e. Pembacaan Hasil:Lihat Metode Marquis

4. Metode Simon: a. Prinsip

Pembentukan senyawa berwarna antara zat yang diperiksa dengan reagen Simon  dalam suasana basa

b. Alat: pipet tetes, pipet, vortex mixer (untuk urin), sentrifus(untuk urin)

c. Reagen: Pereaksi I = 20 % larutan sodium karbonat dalam akuades, Pereaksi II = 50 % larutan asetaldehida etanolik, Pereaksi III = 1 % larutan sodium nitroprusida dalam akuades,Eter (untuk urin),Natrium hidroksida (NaOH) 4 N (untuk urin) Etanol 95 % (untuk urin).

d. Cara Kerja: Untuk pemeriksaan urin lakukan dulu seperti pada metode marquis, langkah 1..sampai 5..

Letakkan beberapa  kecil specimen  pada lekukan plat tetes dan campurkan dengan  larutan I satu tetes, lalu tambahkan 2 tetes larutan II, lalu  tambahkan 

beberapa tetes larutan III memberi  warna biru untuk metamfetamin dan amin sekunder lain. Amfetamin dan amin primer lain memberi  warna merah muda 

perlahan sampai merah cherry. Tes ini dapat membedakan amfetamin dan  metamfetamin.

e. Pembacaan Hasil: Hasil akhir memberi  warna biru untuk metamfetamin dan amin sekunder lain. 

Amfetamin dan amin primer lain memberi  warna merah muda perlahan sampai merah cherry. Tes ini dapat membedakan amfetamin dan metamfetamin. Namun  beberapa zat tambahan dapat memberi  negatif palsu.

 

5. Metode Garam Fast Blue B 

a. Prinsip: specimen  diekstraksi dengan petroleum eter, lalu  direaksikan dengan Garam Fast Blue B membentuk senyawa berwarna

b. Alat : kertas saring, spatel, pipet tetes

c. Reagen:Reagen padat : Garam Fast Blue B (di-o-anisidinetetrazolium klorida)Encerkan Garam Fast Blue B dengan natrium sulfat anhydrous (1 :100)

Larutan I : Petroleum eter,Larutan II : Larutan cair dari natrium bikarbonat 10 % (w atau w)

d. Cara Kerja:Lipat 2 kertas saring menjadi seperempat, buka sebagian untuk membentuk  corong

 Letakkan beberapa  kecil bubuk tanaman kanabis atau resin atau setetes kecil kanabis cair pada bagian tengah kertas sebelah atas Tambahkan 2 tetes larutan 1, 

Biarkan cairan sampai menembus kertas sebelah bawah , Pisahkan kedua kertas saring, Buang kertas bagian atas dan biarkan kertas bagian bawah mengering,Tambahkan beberapa  kecil reagen padat pada kertas saring bawah dan tambahkan  2 tetes larutan pereaksi II

e. Pembacaan Hasil:  Warna noda merah keunguan pada bagian tengah kertas saring menandakan  adanya

kanabis, warna ini yaitu  kombinasi bermacam warna dari berbagai kanabinoid yang berbeda yaitu   komponen mayor dari kanabis; THC=merah, CBN = ungu, CBD =  oranye.

-Reagen padat berwarna putih atau putih kekuningan saat baru dibuat. Simpan  reagen dalam kantong plastik pada area  kering dingin, disarankan  di dalam 

freezer. bila  reagen terdekomposisi, akan berubah warna menjadi keabuan dan  harus dibuang.

Fast Blue B bersifat potensi  karsinogenik, disarankan  menggantinya dengan dye  Fast blue B.

Untuk meningkatkan spesifisitas tes,  lah perlu untuk memakai   materi yang diperiksa sesedikit mungkin, tak lebih dari ujung korek api dan  memakai  2 kertas saring. Kertas saring sebelah atas yang dibuang sebelum 

terjadinya warna, mencegah ekstraksi kembali dyes yang ada pada materi  tanaman sebelum mencapai kertas saring bawah dan menghasilkan reaksi positif 

palsu., Larutan 2 menghasilkan keadaan  basa yang  meningkatkan intensitas reaksi  warna antara kanabinoid dan garam Fast Blue B.

6. Metode Garam Fast Blue B 2..

a. Prinsip: specimen  diekstraksi dengan kloroform, lalu  direaksikan dengan Garam  Fast Blue B membentuk senyawa berwarna

b. Alat: Tabung reaksi, Spatel, Pipet tetes, Pipet ukur

c. Reagen:  Reagen padat : Garam Fast Blue B (di-o-anisidinetetrazolium klorida... Encerkan Garam Fast Blue B dengan natrium sulfat anhidrous (2,5 :100)

 Larutan I : Kloroform, Larutan II : Larutan natrium hidroksida cair 0,1 N

Cara Kerja:   Letakkan beberapa  kecil zat yang  diperiksa dalam tabung reaksi, Tambahkan sedikit sekali reagen padat dan 1 mL larutan I ,Kocok tabung selama 1 menit ,Tambahkan 1 mL larutan II,Kocok tabung reaksi selama 2 menit,Tegakkan tabung rekasi selama 2 menit

e. Pembacaan Hasil:  Warna, seperti pada metode I, pada lapisan cairan kloroform bagian bawah 

menandakan  hasil positif. Warna dari lapisan atas diabaikan.

7. Tes Duquenois

a. Prinsip: Cuplikan bereaksi dengan asetaldehid atau vanilin dalam suasana asam sehingga terjadi perubahan warna yang larut dalam kloroform.

b. Alat: Tabung reaksi b...  Pipet tetes, Vorteks Mixer

c. Reagen: Larutan I: Lima tetes asetaldehida dan 0,4 g vanilin dilarutkan dalam 20 mL  etanol 95 %, Larutan II : Asam Hidroklorida pekat, Larutan III : Kloroform

Larutan I harus disimpan dalam area  gelap dan dingin, buang bila ada perubahan warna menjadi kuning tua

d. Cara kerja :  Masukkan sedikit zat yang  diperiksa ke dalam tabung reaksi, kocok dengan 2 mL larutan I selama 1 menit,tambahkan 2 mL larutan II, kocok campuran,Biarkan selama 10 menit, bila  muncul warna, tambahkan 2 mL larutan III.,

e. Pembacaan Hasil : bila  lapisan bagian bawah (kloroform) menjadi berwarna ungu violet, menandakan 

adanya produk kanabis.

8. Metode Bratton Marshall

a. Prinsip:  Pembentukan senyawa berwarna violet dengan Natrium Nitrit dan asam sulfamat dalam suasana asam

b. Alat: tabung reaksi, pipet tetes

c. Reagen: Asam Sulfat 10%,Natrium Nitrit 0,1% (harus dibuat baru), Asam Sulfamat 0,5%, N-1 Naphtylendiamine dihydrochloride 0,1%

d. Cara Kerja:   Ke dalam tabung reaksi masukkan 4 ml urin, Tambahkan 1 tetes H2SO4 10% dan 1 tetes Natrium Nitrit 0,1%, Biarkan selama 0,5 menit,

Tambahkan 1 tetes larutan asam sulfamat 0,5% dan biarkan 0,5 menit,Teteskan larutan N-1 Naphtylendiamine dihydrochloride 0,1%,

e. Pembacaan Hasil:  bila   terbentuk warna violet secara perlahan-lahan, diduga specimen .mengandung nitrazepam, sehingga perlu pemeriksaan lebih lanjut (konfirmasi test)

9. Metode Liebermann

a. Prinsip:  Parasetamol sesudah  diekstraksi dengan eter pada pH 3-4 (HCl 2 N) bereaksi  dengan NaNO2 dalam suasana H2SO4 pekat membentuk senyawa berwarna ungu.  specimen  yang diperiksa sesudah  diekstraksi dengan eter pada pH 3-4 (HCl 2 N), bereaksi

dengan NaNO2 dalam suasana H2SO4 pekat membentuk senyawa berwarna. Tes .dilakukan untuk memberi warna jelas pada fenol.

b. Alat: tabung reaksi, Sentrifuse, Waterbath, Pipet tetes, Pipet ukur

c. Reagen:  HCl 2N, Eter, Pereaksi Liebermann (1 gram NaNO2 dalam 10 ml H2SO4 pekat)

d. Cara Kerja:  Kedalam tabung reaksi dimasukkan urin sebanyak 2 ml lalu  ditambahkan  HCl 2 N sampai pH 3-4,Ekstraksi dengan 5 ml eter selama 15 menit,

Keringkan ekstrak di waterbath,Residu yang diperoleh  ditambahkan 1 tetes pereaksi Liebermann,

10. Metode Alpha naftol

a. Prinsip:  Parasetamol diasamkan dengan HCl 10%, bereaksi dengan NaNO2 dalam suasana alkalis dengan penambahan alpha napthol membentuk senyawa berwarna merah

b. Alat: tabung reaksi, pipet tetes, pipet ukur

c. Reagen: HCl 10%,Natrium Nitrit 1%, Pereaksi Alpha napthol (Alphanapthol 1% dalam NaOH 10%)

d. Cara Kerja:  Kedalam tabung reaksi dimasukkan urin sebanyak 1 ml lalu  ditambahkan  HCl 10% dinginkan

Tambahkan 2-3 tetes larutan Natrium Nitrit 1%

Tambahkan 2-3 tetes Alphanapthol 1% dalam NaOH 10% (dibuat baru)

e. Pembacaan Hasil: .bila   terbentuk warna violet secara perlahan-lahan, diduga specimen  mengandung nitrazepam, sehingga perlu pemeriksaan lebih lanjut (konfirmasi test)

11. Metode O-Cressol

a. Prinsip:.Parasetamol dan metabolitnya dihidrolisa dalam suasana asam menjadi paraAminophenol, dengan asam cresol membentuk senyawa berwarna biru terang

b. Alat: pipet, tabung reaksi

c. Reagen: dipakai semua reagen proanalisa

 Pereaksi o-Cressol,Jenuhkan pereaksi o-Cressol

Kocok 10 ml o-Cressol dengan 1 aquadest, biarkan selama 24 jam sebelum  dipakai Ammonium Hidroksida 2 mol atau l (2M), HCl 36%, Standar urin

dipakai urin specimen pasien yang sudah  mengkonsumsi Parasetamol 1  gram dalam waktu 24 jam

Cara Kerja: Pipet 0,5 ml specimen (test urin, standar urin dan aquadest sebagai blanko) masing-masing tambahkan 0,5 ml HCL 36% lalu  panaskan diatas 

waterbath selama 10 menit pada suhu 100oC

 Ke dalam campuran diatas tambahkan 10 ml air, 1 ml O-Cressol 1% dalam air  dan 4 ml Ammonium Hidroksida 2 mol atau l (2M), Perhatikan warna yang terbentuk

e. Pembacaan Hasil: bila   terbentuk warna biru, diduga specimen mengandung Parasetamol, sehingga 

perlu pemeriksaan lebih lanjut (konfirmasi test)

12. Metode Feri Chlorida

a. Prinsip: Pembentukan senyawa berwarna ungu antara FeCl3 dengan Asam Salisilat

b. Alat : pipet, tabung reaksi

c. Reagen :  Larutan FeCl3

d. Cara Kerja :  1.Spesimen Urin:Pipet 2 ml urin,

Tambahkan 3 tetes larutan FeCl3 5% , Spesimen cairan lambungPanaskan sampai mendidih selama 10 menit beberapa bagian specimen  dengan HCl 0,1N dalam jumlah volume yang sama, bila perlu saring dengan 

kertas saring,Tambah NaOH 0,1N sampai netral, lalu  tambahkan 3 tetes FeCl3 5% 

e. Pembacaan Hasil:  bila   terbentuk warna ungu, diduga specimen mengandung Salisilat, sehingga perlu 

pemeriksaan lebih lanjut (konfirmasi test)

13. Metode Trinder

a. Prinsip : Terbentuknya senyawa berwarna ungu antara asam salisilat dan merkuri khlorida  dalam suasana asam

b. Alat: pipet, tabung reaksi, kertas saring

c. Reagen:  Pereaksi Trinder 40 gram Merkuri Klorida dilarutkan dalam 850ml asam hidroklorida 0,1 M (1mol atau L)  dan 40 mg feri nitrat trihidrat, diencerkan sampai 1l dengan aquadest,Asam Hidroklorida 0,1M

Natrium Hidroksida 0,1M,

d. Cara Kerja:  Spesimen Urin ,Masukkan 1 ml urin pH (5-6) ke dalam tabung reaksi, lalu  tambahkan 5 

tetes reagen Trinder, kocok,Spesimen darah,

Masukkan 0,5 ml plasma kedalam tabung reaksi, lalu  tambahkan 4,5 ml  pereaksi Trinder, kocok lalu  sentrifus

 Spesimen cairan lambung, Untuk specimen yang berupa cairan lambung perlu dilakukan persiapan 

specimen dengan cara sebagai berikut;Masukkan 2 ml cairan lambung ke dalam tabung reaksi tambahkan 2 ml HCl  0,1M, didihkan selama 10 menit, dinginkan, lalu  saring bila  perlu,  netralkan filtrate dengan menambahkan larutan NaOH 0,1M,Kedalam filtrat cairan lambung tambahkan 3 tetes pereaksi trinder, campur  selama 5 detik

e. Pembacaan Hasil:  bila   terbentuk warna ungu, diduga specimen mengandung Salisilat, sehingga perlu 

pemeriksaan lebih lanjut (konfirmasi test)

14. Kalium Bikromat

a. Prinsip :  Terbentuknya warna hijau hasil oksidasi antara etanol dalam spesimen urin  dengan kalium bikromat dalam suasana asam.

b. Alat: Kertas saring Whatman (Glass-Fibre filter paper), tabung reaksi, penangas air

c. Reagen :  Larutan kalium bikromat (K2Cr2O7) 2,5 %

Asam sulfat (H2SO4) 50 %,

d. Cara Kerja :  Masukkan 5 mL spesimen urin dalam tabung reaksi, lalu tutup , Pada kertas saring teteskan K2Cr2O7 tambahkan H2SO4,Masukkan kertas saring itu  dibagian atas leher tabung,Sumbat mulut tabung dengan gabus dan panaskan pada penangas air 

suhu 100° C selama 2 menit

e. Interpretasi Hasil :   Perubahan warna dari kuning menjadi hijau menandakan alkohol positif.,Etanol memberi  reaksi positif bila kadarnya lebih dari 40 mg %.

15. Mikrodifusi

a. Prinsip :  Di dalam area  yang kedap, alkohol dalam spesimen urin akan menguap dan  bereaksi dengan kalium bikromat dalam suasana asam sehingga terjadi perubahan  warna.

b. Alat : cawan Conway ,pipet ukur

c. Reagen: Kalium bikromat: 0,5 g Kalium bikromat dalam 100 ml asam sulfat 60%

d. Cara Kerja : tempatkan  spesimen di bagian tepi cawan sampai tertutup dasarnya,Tambahkan beberapa ml kalium bikromat di sekitar area  spesimen itu . Tutup rapat cawan itu  dan inkubasi pada suhu 37°C selama 1 jam

e. Interpretasi Hasil : Warna kalium bikromat berubah dari kuning menjadi hijau lalu   biru.

16. Metanol

a. Prinsip : Terbentuknya warna hijau hasil oksidasi antara etanol dengan kalium bikromat  dalam suasana asam.

b. Alat Tabung reaksi dan Pipet tetes

c. Reagen :Larutan kalium bikromat (K2Cr2O7) 2,5 % dalam asam sulfat (H2SO4) 50 %, Asam kromotropat

Etanol,Cara Kerja :   Ke dalam 1 ml urin, tambahkan 1 tetes K2Cr2O7 2,5 % dalam (H2SO4) 50 %,Biarkan pada suhu kamar selama 5 menit Tambahkan 1 tetes etanol dan beberapa mg asam kromotropat,Tambah H2SO4 sehingga muncul  suatu lapisan pada dasar tabung

e. Interpretasi hasil ;  Warna ungu pada lapisan pemisah menandakan  adanya metanol.

 formaldehid akan memberi  reaksi positif pada uji ini.

Beberapa pereaksi warna yang sudah dipaparkan, sekarang sudah tersedia dalam  bentuk kit yang didesain sedemikian rupa sehingga tidak diperlukan pengukuran bahan kimia atau peralatan tabung reaksi atau plat tetes. Pada masing-masing tabung plastik transparan yang dilengkapi dengan pereaksi kimia untuk setiap pengujian. beberapa  tertentu bahan yang

diduga ditambahkan lalu  pengujian dilakukan sesuai instruksi .

-- Reagen Duquenois-Levine

Tes ini awalnya dikembangkan oleh Pierre Duquenois, dan diadopsi WHO sebagai tes yang untuk ganja. Reagen terdiri dari 2 gram vanillin dan 2,5 mililiter asetaldehida sampai 100 mililiter etanol. Tes Duquenois-Levine menerangkan  penentuan resin ganja dengan membentuk produk berwarna ungu di atas, yang diekstraksi dengan kloroform.

-- KN (Fast Blue B Salt) Reagen

KN = Kanto-Shin'etsu, Control Narcotics Office, Jepang

Tes presumtif ini dirancang untuk mengidentifikasi keberadaan THC pada marijuana, hashish atau hash oil. ini  juga dirancang untuk bereaksi dengan bahan daun

hijau Marijuana segar. sesudah  pecahnya ampul kedua, akan terjadi dual lapisan dan lapisan bawahnya akan berwarna merah tomat untuk tes positif. Reagen KN mengandung larutan naphthanil diazo blue B dalam kloroform dan larutan natrium hidroksida dalam air.

--Reagen Mecke Modifikasi

Reagen Mecke dipakai  sebagai uji sederhana untuk menduga alkaloid dan senyawa lainnya. Reagen yang dibuat dengan penambahan 100 mL asam sulfat pekat

dengan 1 g asam selenat diteteskan ke zat yang diuji.

Warna biru ke hijau yang dihasilkan oleh Reagen Mecke dengan morfin diperkirakan muncul  dari rearrangement awal hingga apomorphine, yang dengan adanya

asam selenat dioksidasi menjadi o-kuinon apomorphine.

-- Pereaksi Mayer

 pereaksi pengendap untuk alkaloid yang dibuat dari larutan merkuri klorida dan kalium iodida dalam air deionisasi. Reaksi yang terjadi yaitu  ,antaralain : 

Alkaloid + K2 [HgI4] ↔ [Alkaloid-H +] [HgI3] - ↓ garam [HgI4]) alkaloidPembentukan endapan putih krem menandakan  adanya salah satu alkaloid narkotika atau amfetamin. Uji Mayer sering yaitu  tes skrining pertama yang dilakukan dan hasilnya dapat menentukan pengujian lebih lanjut dengan Reagen Marquis atau Reagen Dille-Koppanyi.

-- Reagen Marquis

Pereaksi Marquis yaitu  tes spot untuk alkaloid yang pertama kali dilaporkan pada tahun 1896. Pereaksi aslinya yaitu  campuran 2 tetes formaldehid 40% dan 3 mililiter asam sulfat pekat. Ini awalnya dipakai  untuk mendeteksi beberapa  kecil alkaloid tertentu, dan untuk membedakannya. Tanda alkaloid yaitu  warna awal yang dihasilkan, juga urutan perubahan warna yang terjadiseiring berjalannya waktu. mulanya 

pereaksi Marquis dipakai  terutama untuk membedakan alkaloid opium. Setiap alkaloid memiliki pola perubahan warna. Reaksi warna morfin dengan Marquis Reagent menghasilkan warna ungu ke violet. Reaksi terjadi antara dua molekul morfin dan dua molekul formaldehid berkondensasi dengan asam sulfat pekat membentuk dimer yang diprotonasi menjadi garam

oxoniumcarbenalum.

--Reagen Cobalt Tiosianat, uji Scott

Reagen terdiri dari larutan Cobalt thiocyanate dalam air dan larutan stannous chloride dalam air. yaitu  uji lapangan yang dipakai  untuk mengidentifikasi kokain

(crack) pada specimen  dijalanan. Uji ini didasarkan pada kompleksasi larutan alkaloid dengan

larutan kobalt (II) tiosianat (Co(SCN)2(H2O)4) yang menghasilkan warna biru akibat perubahan dari Cobalt oktahedral (II) (pink merah ) menjadi Co (II)tetrahedral (biru). Reaksinya ,antaralain : 

[Co (SCN) (H2O) 5] + (aq) + 3 SCN- (aq) + 2 R3NH + ↔ (R3NH) 2 [Co (SCN) 4] + 5 H2O (l)

yang mana  [R3NH] + mewakili ion kokain terprotonasi.

Pada suhu 4°C, peka uji ditemukan dua kali lipat dibandingkan suhu kamar (22°c... , sedang  suhu di atas 40°C menurunkan peka uji lebih dari dua kali lipat

dibanding suhu kamar. Temuan ini dengan jelas menandakan  dampak penyimpanan, pemakaian, dan interpretasi alat uji kokain yang tersedia secara komersial di lapangan dapat mengalami kerusakan akibat penyimpanan pereaksi pada suhu panas.

--Reagen Ehrlich

Pereaksi ini yaitu  larutan p-dimethylamino benzaldehyde dan asam klorida pekat. Uji ini didasarkan pada reaksi kondensasi satu molekul LSD dengan satu molekul pdimethylamino benzaldehyde, terbentuk carbinole. sesudah  air protonasi dieliminasi

membentuk ion karbenium, yang lalu  bereaksi dengan penambahan molekul kedua LSD, lalu  teroksidasi menjadi sianin ungu.

--Reagen Dille-Koppanyi

Pereaksi ini terdiri dari dari dua bagian yaitu: bagian A yaitu  0,1 g kobalt (II) asetat dihidrat yang dilarutkan dalam 100 ml metanol dicampur dengan 0,2 ml asam asetat glasial. Bagian B terdiri dari 5% isopropilamina (v atau v) dalam metanol. Dua tetes reagen A ditambahkan ke substansi diikuti dengan penambahan satu tetes reagen B lalu  perubahan warnanya

dilihat . Tes ini menghasilkan warna ungu cerah pada  fenobarbital, pentobarbital, amobarbital dan secobarbital. Barbiturat yang tidak tersubstitusi N dapat dideteksi dengan Reagen DilleKoppanyi. Isopropilamina bertanggung jawab atas deprotonasi molekul barbiturat. Warna ungu dipicu  oleh pembentukan kompleks antara dua molekul barbiturat, dua molekul isopropilamina di sekitar kobalt tetrahedral (II). Isopropilamina bertindak sebagai stabilisator kompleks.

--Reagen Mandelin

Reagen Mandelin dibuat dengan penambahan 100 mL asam sulfat pekat (95-98%) pada 1 gram amonium vanadat. Larutan asam amonium vanadat-sulfat, untuk uji strychnine pertama kali diusulkan oleh Mandelin. Beberapa alkaloid selain strychnine akan memberi reaksi warna dengan reagen ini. berdasar  Witthaus, alkaloid berikut memberi  reaksi mirip strychnine dengan reagen ini:

- Yohimbine, alkaloid yang diperoleh dari kulit kayu Corynanthe yohimbe, memberi warna ungu yang sama dengan reagen Mandelin pada  strychnine. Namun sesudah  pengenceran dengan air warna ungu yang dihasilkan oleh strychnine berubah menjadi warna merah mawar, sedang  dengan yohimbine tidak ada warna yang terjadi pada pengenceran. Warna yang khas terjadi dari dua puluh tiga dari alkaloid umum diperoleh.

-Apomorphine dan papaverin menghasilkan warna violet atau biru-violet.

- Curarin memberi warna yang sama, namun  muncul nya warna lambat. Curarin, tidak diekstraksi dengan pelarut organik dalam larutan alkali.

-Gelsemin menghasilkan warna ungu atau merah violet.

B. Kromatografi Lapis Tipis

Kromatografi lapis tipis (KLT) atau thin layer chromatography (TLc...  yaitu  metode   yang banyak dipakai  untuk pemisahan dan identifikasi obat. ini  berlaku juga untuk  obat dalam keadaan murni, yang diekstraksi dari formulasi farmasi, bahan-bahan 

yang diproduksi secara tidak resmi, dan specimen  biologis. Kromatografi lapis tipis yaitu  contoh  kromatografi planar  disamping kromatografi kertas. Berbeda dengan kromatografi kolom yang mana fase 

diamnya dikemas dalam kolom, maka pada kromatografi lapis tipis, fase diamnya yaitu   berupa lapisan seragam pada permukaan bidang datar yang didukung oleh lempeng kaca,  pelat aluminium, atau pelat plastik , Fase gerak atau pelarut pengembang akan bergerak naik sepanjang fase diam  sebab  adanya gaya kapilaritas pada sistem pengembangan menaik ,Pemilihan fase gerak baik untuk TLC maupun HPTLC didasarkan pada keterpisahan  senyawa dalam analit yang didasarkan pada nilai Rf atau hRf (100Rf... . Pemisahan  senyawa terjadi berdasar  kompetisi pengikatan solut dan solven pada fasa diam. Nilai 

Rf diperoleh dari membagi jarak pusat kromatogram dari titik awal dengan jarak pergerakan pelarut dari titik awal. Penghitungan nilai hRf ditunjukkan dengan persamaan  

1. Fase diam (stationary phase... 

Pelat KLT konvensional dapat disiapkan di laboratorium dengan metode standar,  namun persiapan lapisan yang direproduksi lebih mudah dicapai dalam pengaturan  pembuatan dan beberapa laboratorium menyiapkan plat mereka sendiri hari ini. Pelat  precoated untuk kinerja tinggi, KLT konvensional dan preparatif tersedia dalam berbagai  ukuran dan ketebalan lapisan yang berbeda, didukung pada lembaran aluminium, kaca  atau plastik. Untuk memberi  stabilitas mekanis dan ketahanan abrasi yang diharapkan    dipakai  lapisan pengikat, seperti poli (vinil alkohol), poli (vinil pirolidon), gipsum atau 

pati dalam jumlah dari 0,1% sampai 10% (b  atau  b...  dimasukkan ke dalam lapisan. Indikator  ultraviolet (UV), seperti zinc silikat yang diaktivasi mangan dengan ukuran partikel yang  mirip  dengan sorben, dapat ditambahkan ke lapisan untuk memvisualisasikan specimen   terpisah dengan pendinginan fluoresensi. Pelat KLT dengan zona preadsorbent sempit  yang terletak di sepanjang satu tepi lapisan tersedia untuk membantu aplikasi contoh 

secara manual.  Silika gel yaitu  fase diam yang paling perlu untuk KLT, dengan adsorben oksida  anorganik lainnya, seperti alumina, kieselguhr (silika gel dengan luas permukaan rendah)  dan Florisil (magnesium silikat sintetik). Sebagian besar sorben silika gel memiliki ukuran  pori rata-rata 6 nm dan dirancang untuk pemisahan molekul kecil (massa molekular relatif  <700).

2. Fase gerak (mobile phase... 

Fase gerak pada KLT dapat dipilih dari pustaka namun  lebih sering dengan mencobacoba sebab  waktu yang diperlukan hanya sebentar. Sistem yang paling sederhana yaitu   campuran 2 pelarut organik sebab  daya elusi campuran kedua pelarut ini dapat mudah 

diatur sedemikian rupa sehingga pemisahan muncul secara optimal. Berikut ini  beberapa petunjuk dalam memilih dan mengoptimasi fase gerak: fase gerak harus 

berpotensi kemurnian yang tinggi sebab  KLT yaitu  metode  sensitif; daya elusi  harus diatur sedemikian rupa sehingga harga Rf terletak antara 0,2 – 0,8; polaritas fase  gerak dapat mempengaruhi kecepatan migrasi solut dan penentuan harga Rf; untuk 

campuran ionik dan polar lebih baik dipakai  campuran pelarut sebagai fase geraknya  dengan perbandingan tertentu.

halaman 3 B

3. Aplikasi (Penotolan)

Obat diteteskan ke plate KLT sebagai titik atau pita dengan ukuran minimum  dengan sebaran  bahan homogen di dalam zona awal. Untuk lapisan berkinerja tinggi,  dengan diameter titik awal yang diharapkan   sekitar 1,0 sampai 2,0 mm, ini sesuai dengan 

volume specimen  100 sampai 200 nL bila  diterapkan  dengan dosimeter (mikropipet). .Untuk pelat KLT konvensional, volume specimen  lima sampai sepuluh kali lipat lebih besar  dapat diterima. Sifat yang diharapkan   dari larutan specimen  dirangkum dalam Tabel . bila   pemindaian densitometri dipakai  untuk deteksi, contoh aplikasi manual dengan perangkat genggam tidak memadai. Untuk densitometri, posisi awal setiap titik harus  diketahui secara akurat, yang dicapai dengan mudah dengan alat mekanis yang beroperasi  pada mekanisme grid yang tepat. specimen  juga harus diterapkan pada lapisan tanpa  mengganggu permukaan, sesuatu yang hampir tidak mungkin dicapai dengan  memakai  aplikasi manual.

Contoh perangkat aplikasi untuk TLC mencakup berbagai kecanggihan dan  otomasi. Perangkat yang paling populer untuk TLC kuantitatif memakai  metode  sprayon. Atomiser nitrogen yang terkendali   menyemprotkan specimen  dari semprit atau kapiler, 

untuk membentuk pita homogen yang sempit pada permukaan pelat. Pelat dipindahkan  bolak-balik di bawah atomiser pada tahap translasi untuk menerapkan pita dengan  panjang antara nol (titik) dan panjang transit maksimum kepala semprot. Band biasanya  berukuran 0,5 atau 1,0 cm, dengan pita yang lebih panjang dipakai  terutama untuk  pemisahan skala preparatif. Tingkat deposisi specimen  juga dapat disesuaikan untuk  mengakomodasi larutan specimen  dengan volatilitas dan viskositas yang berbeda. 

Keuntungan dari semprotan pada perangkat yaitu  volume volume larutan standar  tunggal yang berbeda dapat diterapkan untuk keperluan kalibrasi dan metode 

penambahan standar kuantifikasi dilakukan dengan mudah dengan membolak-balik  specimen  yang sudah  diterapkan pada lapisan dengan larutan standar. Aplikator specimen   otomatis lengkap dapat diprogram untuk memilih specimen  dari rak botol dan menyimpan 

volume tetap specimen , pada tingkat yang terkendali  , ke posisi yang dipilih di piring.  Aplikator secara otomatis membilas dirinya sendiri di antara aplikasi specimen  dan dapat  melihat atau mengencangkan seluruh piring dengan specimen  dan standar yang berbeda  tanpa intervensi operator. pemakaian KLT dapat berupa analisa  kualitatif dan analisa  kuantitatif. Pada  analisa  kualitatif, KLT dapat dipakai  untuk uji identifikasi senyawa baku. Parameter  pada KLT yang dipakai  untuk identifikasi yaitu  nilai Rf. Dua senyawa dikatakan identik  bila  berpotensi nilai Rf yang sama bila  diukur pada keadaan  KLT yang sama. Untuk 

meyakinkan identifikasi dapat dilakukan dengan memakai  lebih dari 1 fase gerak dan  jenis pereaksi semprot. Untuk analisa  kuantitatif pada KLT dapat dipakai  dua cara. Pertama, bercak  pada plat KLT diukur langsung pada lempeng dengan memakai  ukuran luas atau  dengan metode  densitometri. Cara kedua yaitu  dengan mengerok bercak lalu menetapkan 

kadar senyawa yang ada  dalam bercak itu  dengan metode analisa  yang lain,  contoh kan dengan metode spektrofotometri.  metode  pengembangan (elusi) utama di TLC bersifat linier, melingkar dan  anticircular, dengan kecepatan fase gerak yang dikendalikan oleh gaya kapiler. analisa  kuantitatif dari suatu senyawa yang sudah  dipisahkan dengan KLT biasanya dilakukan  dengan densitometer langsung pada lempeng KLT (atau secara in situ). Densitometer 

dapat bekerja secara serapan atau flouresensi, yang mana  kebanyakan densitometer  berpotensi sumber cahaya yang diarahkan menuju monokromator (untuk memilih  rentang panjang gelombang yang cocok antara 200-800), sistem untuk memfokuskan sinar 

pada lempeng, pengganda foton, dan rekorder.  Densitometer dapat bekerja secara serapan atau flouresensi. Kebanyakan  densitometer berpotensi sumber cahaya monokromator (rentang panjang gelombang  190 s atau d 800 nm) untuk memilih panjang gelombang yang cocok, sistem untuk 

memfokuskan sinar pada lempeng, pengganda foton, dan rekorder. pemakaian  monokromator lebih menguntungkan sebab  memudahkan pengubahan panjang  gelombang dan menghasilkan berkas sinar dengan sedikit panjang gelombang. Jenis  sumber cahaya tergantung pada panjang gelombang cahaya yang dipakai , yaitu: lampu  hidrogen, raksa atau, ksenon untuk pengukuran sinar UV dan lampu wolfram untuk  panjang gelombang sinar tampak. Output detektor dikonversikan menjadi signal dan 

diamplifikasi. Sebagai tambahan untuk scanning instrumen densitometer dilengkapi  dengan digital konverter, dan data akan diproses secara digitalisasi oleh komputer. Analis dapat bekerja dengan densitometri pada jangkauan panjang gelombang 190 s atau d  800 nm. Terjadinya penyimpangan baseline yang dipicu  oleh variasi ketebalan dan  ketidakseragaman lapisan pada densitometer   kecil dan level signalnya relatif  tinggi. Prinsip kerja spektrofotodensitometri berdasar  interaksi antara radiasi  elektromagnetik dari sinar UV-Vis dengan analit yaitu   noda atau bercak pada  plat. Radiasi elektromagnetik yang datang pada plat diserap   oleh analit, ditransmisi  atau diteruskan bila  plat yang dipakai  transparan. Radiasi elektromagnetik yang 

diserap   oleh analit atau indikator plat dapat diemisikan berupa flouresensi dan  fosforesensi. Sumber radiasi pada spektrodensitometri ada tiga macam tergantung pada  rentang panjang gelombang dan prinsip penentuan. Lampu deuterium dipakai untuk 

pengukuran pada area  ultraviolet (190-400 nm) dan lampu tungsten dipakai  untuk pengukuran pada area  sinar tampak (400-800 nm) sedang  untuk penetuan secara  fluoresensi dipakai  lampu busur merkuri bertekanan tinggi. Untuk penentuan kadar, yang ditetapkan yaitu  penyerapan  maksimum kurva 

penyerapan . bila  penyerapan  ini untuk penentuan kadar yaitu    rendah atau senyawa  awalnya  mengpenyerapan  di bawah 220 nm, maka sering  senyawa diubah dulu menjadi  suatu zat warna melalui reaksi kimia, dan penyerapan  ditentukan dalam area  sinar tampak  (kolorimetri). Walaupun pada semua penentuan kadar penyerapan  yang diukur, penyelesaian 

percobaannnya   berbeda. Berikut ini yaitu  contoh penyelesaiannya :

a. memakai  Hukum Lambert Beer

A = ε c d

A yaitu  daya serap, ε yaitu  daya serap molar (dalam mole cm-1), c yaitu  kadar 

(dalam mole liter-1) dan d yaitu  panjang jalur (dalam cm).  Persamaan di atas berlaku menyeluruh sebagai dasar pokok analisa  kuantitatif pada spektroskopi serapan. Suatu cara sederhana untuk mengkuantitasi suatu bahan  penyerap yaitu  dengan mengukur daya serapnya pada panjang gelombang tertentu 

dan menyubstitusikan A, ε dan d ke persamaan di atas untuk memperoleh  c.

b. memakai  Kurva Kalibrasi

Bila ε tidak diketahui dan terokan murni analit tersedia, kurva kalibrasi dapat dibuat  (daya serap pada  kadar). Lereng kurva itu  yaitu  εd dan bila d diketahui 

maka ε dapat dihitung. Terokan tunggal yang diketahui kadarnya dapat dipakai   untuk menentukan ε, namun  ini  kurang handal dibandingkan  pemakaian kurva kalibrasi.  juga  kadar terokan yang tak diketahui dapat dibaca langsung dari kurva kalibrasi  dengan mencari daya serap yang tak diketahui pada kurva dan menarik garis tegak  lurus ke bawah pada sumbu kadar (sumbu x). Metode ini   bermanfaat terutama  bila  nyata terlihat adanya penyimpangan pada  hukum Beer (non linear).

Point-of-care test (POCT), mengacu pada pengujian yang dilakukan secara dekat  pada  pasien atau subjek, dengan tujuan memberi  hasil yang segera. Laboratory

Medicine Practice Guideline (National Academy Clinical Biochemistry) mengartikan  POCT  sebagai pengujian laboratorium klinis yang dilakukan di dekat lokasi perawatan pasien,  biasanya oleh petugas klinis yang ketrampilan utamanya tidak dalam ilmu laboratorium klinis  atau bisa dilakukan oleh pasien (self-testing... . maka  POCT dapat dianggap sebagai  pengujian yang dilakukan di luar laboratorium tradisional dan dapat juga dinamakan  sebagai uji  laboratorium pengawasan perawatan di area , pengujian di samping area  tidur, 

pengujian dekat-pasien (Near Patient Test=NPT), pengujian di rumah dan perawatan diri  sendiri.

POCT dalam toksikologi lebih ditujukan untuk pengujian pada  obat yang  disalahgunakan dan alcohol. POCT dapat ditinjau dari beberapa sudut pandang.

berdasar  dasar reaksinya ada  beberapa jenis, yaitu:

Obat kromogenik – konjugat  Reaksi aglutinasi

 Antibody kromogenik,

berdasar  pengamatan hasil bisa secara:

. Visual  Semi automatik

berdasar  bentuknya ada  bentuk:

Test-cup , Strip dan dip card (kartu celup),Cassette

  Automatic ,

specimen  pengujian POCT dapat berupa: 

 Urin,Udara ekspirasi, Saliva atau oral fluid,Keringat ,

Metode yang dikembangkan yaitu  didasarkan pada reaksi aglutinasi lateks yang lebih  dinamakan  laminar flow immunoassay (LFI). pemakaian sistem POCT dapat dilakukan untuk membantu diagnosa  penyakit, 

pemantauan terapi, atau mendeteksi racun. Namun, dalam konteks toksikologi analitis, istilah  ini   diterapkan pada skrining obat terlarang. Sifat tes yang dilakukan juga  akan tergantung pada di mana tes itu dilakukan. Perangkat yang bisa dipakai  pada 

pengujian pinggir jalan atau pintu masuk untuk dipakai  oleh petugas polisi atau petugas  bea cukai yang terlatih harus portabel, tangguh dan dapat diandalkan, sedang  perangkat  POCT untuk pengujian di area  kerja harus mudah dipakai  dan memberi  hasil yang 

tidak ambigu. bila  hasilnya memicu   aksi  hukum, dalam keadaan ini, perlu agar  specimen  diambil untuk analisa  konfirmasi oleh GC-MS atau HPLC-MS hasil uji POCT obat  terlarang (drugs of abuse... . 

1. specimen  dan pengumpulan specimen .POCT memakai  specimen  yang hanya memerlukan penanganan minimal sebelum  analisa , matrik umum berupa urine, darah, cairan oral atau keringat. juga , udara nafas  dipakai  untuk mendeteksi dan mengukur etanol dan karbon monoksida.  Pengujian penyalahgunaan obat terlarang biasanya dilakukan dengan urin, dengan  memakai  sistem POCT berdasar  immunoassays. Cairan oral sudah  disarankan sebagai 

alternatif pengganti untuk specimen  air liur, sebab  lebih dapat diawasi, dan terhindar dari  mungkin  terjadinya gangguan dan pemalsuan. Namun, specimen  air liur lebih cenderung  menular dibandingkan  urin dan volume specimen  mungkin terbatas.  Air liur memiliki pH rata-rata 6,5, namun stimulasi aliran air liur dapat meningkatkan pH  ini sampai pH 8 yang memberi efek nyata pada plasma: rasio air liur dari elektrolit 

lemah. Senyawa lipophilic lebih mudah berdifusi dari plasma menjadi air liur dan jadi obat .induk: rasio metabolit mungkin berbeda dalam air liur dibandingkan dengan plasma dan urine.

Kokain: rasio benzoylecgonine, contoh nya, lebih tinggi dalam air liur dibandingkan  di plasma dan 

urine. maka  kit POCT yang dirancang untuk dipakai  dengan specimen  cairan oral  mungkin perlu menargetkan analit yang berbeda dibandingkan  yang dipakai  saat menguji urin .dan pastinya target konsentrasi akan lebih rendah. Keuntungan dari cairan oral untuk  pengujian di lapangan yaitu  bahwa hasilnya berkaitan  langsung dengan konsentrasi obat 

dalam darah, dibandingkan dengan adanya obat dalam urin. Seperti air liur, produksi keringat tidak seragam dalam jumlah maupun komposisi.  Keringat insensible yaitu  keringat yang keluar dari tubuh melalui kulit yang tidak membentuk  tetesan. Keringat sensible, yaitu keringat yang bisa dilihat sebagai cairan, dapat menetes,  muncul  dari dua jenis kelenjar, apokrin dan eccrine. Yang pertama, yang cenderung berada di 

area  aksila, kemaluan dan mammae, lebih besar dan mengeluarkan zat yang lebih banyak. 

Permukaan kulit juga ditutupi dengan sekresi sebaceous, terutama lipid, konsentrasi tinggi 

ditemukan di kulit kepala dan dahi. maka  cairan yang dihimpun  untuk analisa    yaitu  campuran sekresi. seperti  rambut, kontaminasi permukaan 

oleh paparan pemakaian narkoba oleh pasien  lain (contoh nya merokok kokain atau ganja... 

yaitu  masalah potensi . .Ada dua metode pengumpulan dan pengujian keringat. Salah satunya yaitu  dengan 

Drugwipe, yang bisa juga dipakai  untuk air liur. Bentuk lainnya yaitu  'plester lengket'  tamper-proof yang bisa dipakai  untuk mengumpulkan keringat selama beberapa hari dan    dipakai  di klinik. Ada konsistensi yang baik antara hasil untuk metadon, morfin

dan opiat, namun  tidak untuk benzoylecgonine, dalam keringat yang dihimpun  di area  yang  berbeda. 

Darah, yang dipakai  untuk pengukuran glukosa POCT oleh penderita diabetes, tidak  dipakai  untuk analisa  obat terlarang, walaupun setidaknya ada satu tes untuk lithium yang  memakai  darah utuh. Matriks lain, seperti rambut dan kuku, tidak secara khusus  disesuaikan dengan teknologi POCT saat ini.

2. Analit

a. Etanol

Untuk menentukan gangguan saat mengemudi atau mengoperasikan mesin, perlu  untuk mengukur atau menurunkan konsentrasi etanol dalam darah. Gas chromatography GCFID yaitu  metode yang paling andal untuk mengukur etanol darah, namun ini jelas tidak  sesuai untuk pengujian di pinggir jalan atau di area  kerja. Namun, pada konsentrasi  kesetimbangan, kadar alkohol dalam udara pernafasan, urin dan cairan oral berkorelasi  dengan konsentrasi dalam darah dan matriks ini dapat dipakai  sebagai alternatif darah. 

Korelasi konsentrasi alkohol dalam darah (blood alcohol concentration=BAc...  dengan keringat 

kurang dapat diandalkan sehingga specimen  keringat paling baik dipakai  untuk tujuan  kualitatif saja.

1) Etanol dalam udara pernafasan

Dasar analisa  etanol dalam udara pernafasan yaitu  Hukum Henry, yang menyatakan .bahwa dalam tempat  tertutup pada suhu dan tekanan tertentu, zat terlarut dalam larutan akan  berada dalam ekuilibrium dengan udara di atasnya. sebaran  etanol antara darah dan udara  alveolar pada 34oC yaitu  2100: 1 dan ini yaitu  faktor yang dipakai  untuk mengubah BrAC 

(breath alcohol concentration) menjadi BAC. maka  2100 liter udara alveolar akan  mengandung jumlah etanol yang sama dengan 1 liter darah.

Instrumen modern memakai  sel bahan bakar di mana oksidasi etanol menghasilkan  arus (contoh nya Intoksilyzer) atau perangkat oksida semikonduktor yang memakai  sensor  khusus  etanol. Sensor oksida semikonduktor diklaim menawarkan banyak manfaat, termasuk  biaya rendah, konsumsi daya rendah dan ukuran kecil, meski mereka memerlukan  kalibrasi 

lebih sering dibandingkan  perangkat sel bahan bakar. Instrumen berbasis laboratorium  memakai  penyerapan inframerah pada dua panjang gelombang (337 dan 344 m) untuk  mengidentifikasi dan mengukur etanol. Dengan memakai  rasio panjang gelombang 

mengurangi risiko interferensi.

2) Etanol saliva

Rasio etanol saliva: darah akan terjadi keseimbangan sekitar 30 menit sesudah  penghentian minum dan akan tetap selama paling sedikit 6 jam. maka  cairan oral 

memberi  alternatif pengukuran etanol dalam darah dan pernafasan. Reagen stik atau strip  untuk pengukuran etanol semi kuantitatif sudah  diproduksi. Prinsipnya yaitu  etanol .dioksidasi oleh enzim alkohol-oksidase, dan hidrogen peroksida yang dihasilkan bereaksi 

dengan tetrametilbenzidin dengan adanya peroksidase. Metanol, etanol dan alil alkohol  memberi  hasil positif. Oksidator kuat akan memberi positif palsu dan zat pereduksi, termasuk asam askorbat dan L-DOPA, akan mengurangi sinyalnya.

b. obat terlarang dalam urin

Secara keseluruhan, tes skrining obat dapat dilakukan secara cepat, sederhana secara  teknis, dan ekonomis.   tes ini sensitif, artinya mereka bisa mendeteksi beberapa   kecil obat atau metabolit obat. Namun, mereka kurang khusus  dan kurang dapat diandalkan 

dibandingkan  tes konfirmasi.   tes skrining obat diketahui menghasilkan hasil tes .false-positive dan false-negative. Tes skrining biasanya dengan specimen  dalam jumlah banyak bersamaam, yang berarti 

bahwa beberapa specimen  urin ditest bersama. Bila beberapa  specimen  urin banyak ditemukan 

positif, specimen  urin personal  dapat diuji ulang untuk mengidentifikasi spesimen positif. sesudah  

specimen  urin diidentifikasi sebagai pengujian positif dengan tes skrining, spesimen diuji ulang 

dengan tes konfirmasi yang lebih khusus  (dan lebih mahal). Dua tes skrining yang lebih umum 

yaitu  kromatografi lapis tipis (KLT) dan HPLC.

c. Uji cairan mulut

Pengujian cairan mulut dapat memakai  Sistem ORALscreen (Avitar) terdiri dari .perangkat pengumpulan cairan oral dan perangkat uji berdasar  membran immunoassay  membran lateral. Paired cairan oral dan specimen  urin dihimpun  dari pemakai  narkoba dan .hasil dari cairan oral dibandingkan dengan analisa  laboratorium urin,  Kesepakatan yang baik untuk mendeteksi kokain dan opiat hingga saat ini 2,5 hari, dan untuk  THC sampai 1 hari, pemakaian pasca dilaporkan. Korelasi yang baik antara hasil cairan urin  dan cairan oral juga dilaporkan untuk specimen  positif metamfetamin..Baru-baru ini, evaluasi enam perangkat uji cairan mulut, termasuk Drugwipe, yang  dipakai  dengan cairan oral dan juga keringat, sudah  dilaporkan. Perangkat diuji dengan 

pengendalian  negatif, dan specimen  pada 0,5, 2 dan 10 kali konsentrasi target melonjak menjadi air 

liur kita . Konsentrasi target yang diusulkan SAMHSA yaitu  untuk air liur, selain dari THC  , Larutan uji diuji dengan metode  MS untuk memverifikasi bahwa 

konsentrasinya benar.  Pengujian keringat

Drugwipe yaitu  detektor seukuran pena yang bisa dipakai  untuk mendeteksi obat  di permukaan, keringat atau air liur. Ini dikembangkan untuk pemakaian mengidentifikasi  obat terlarang. Obat generasi kedua, dengan peka yang meningkat,  dikembangkan secara khusus untuk pengujian polisi lalu lintas jalan raya. Keringat dahi  biasanya diambil specimen nya. Beberapa perangkat tersedia: Drugwipe II mendeteksi analit  tunggal: opiat, kokain, amfetamin (metamfetamin  atau  MDMA), ganja, atau benzodiazepin.  Drugwipe II Twin mendeteksi pasangan jenis obat: opiat  atau  kokain atau ganja  atau  amfetamin. 

Drugs-wipe 5 secara bersamaan mendeteksi lima analit. peka yang diberikan yaitu  20- 300 g  atau L untuk keringat atau air liur dan 2-50 ng atau cm2 untuk permukaan.

3. Tes Immunoassay

Perangkat yang lebih baru untuk skrining obat terlarang didasarkan pada immunoassays  aliran lateral (immunoassays lateral flow=ILf... . Bentuk strip biasanya memiliki  sumbu untuk dicelupkan ke dalam specimen  atau reservoir (susia ) ke dalam specimen  yang 

dipipetisasi. Saat specimen  bermigrasi di sepanjang jalur, antibodi yang diberi label dengan emas 

koloid, manik-manik lateks atau label visualisasi lainnya yang sesuai, dibawa dalam aliran  cairan. Antigen yang diimobilisasi, yang biasanya terikat sebagai garis pada strip pada jarak  yang sesuai dari titik asal, akan menangkap antibodi terikat nondrug untuk menghasilkan garis  antibodi berlabel yang terlihat. Intensitas garis akan maksimal bila tidak ada obat dalam  specimen . Bila ada cukup analit dalam specimen  untuk mengikat semua antibodi, tidak ada garis  yang  terlihat. maka  dengan menentukan jumlah antibodi yang tepat,  perangkat dapat diproduksi untuk memberi  nilai cut-off yang diperlukan . Prinsip ILF didasarkan pada 2 pendekatan utama yaitu format pengujian langsung sandwich) dan format uji kompetitif. 

1) Format sandwich: analit ditangkap di antara dua antibodi komplementer. Salah satu  antibodi ini dikonjugasikan ke reagen deteksi dan ditahan di pad pelepasan konjugasi,  sedang  antibodi lainnya diimobilisasi pada garis uji pada membran. Setiap kelebihan  antibodi berlabel akan ditangkap pada garis pengendalian . Intensitas warna yang terlihat pada 

garis uji dapat menandakan  jumlah analit yang ada dalam specimen . Jenis tes ini    dipakai  untuk analisa  yang lebih besar dengan beberapa sisi antigenik.

2) Format kompetitif dipakai  untuk analit yang lebih kecil yang memiliki satu  determinan antigenik tunggal dan sebab  itu tidak dapat mengikat dua antibodi 

secara bersamaan. Dalam jenis format assay ini, antigen biasanya diimobilisasi pada  garis uji. bila  analit ada dalam specimen  akan bereaksi dengan antibodi pendeteksi yang  lalu  tidak dapat mengikat pada garis uji. sebab  itu, kurangnya sinyal pada 

garis uji mengindikasikan hasil positif. Strip pengendalian  sering didan kan di luar antigen terikat. Reaksi positif menandakan   bahwa specimen  sudah  mencapai zona (specimen  cukup) dan reaktan berfungsi dengan baik.  Beberapa antigen dapat ditempatkan  pada satu strip, memberi  serangkaian tes. Satu  sistem memakai  turunan obat berlabel, antibodi immobilisasi terikat ke membran,  sehingga hasilnya positif ditunjukkan oleh munculnya garis. Dengan kedua jenis perangkat  itu , garis samar harus dibaca sebagai negatif.

a. Cara kerja

Siapkan Card atau Strip Test untuk pemeriksaan masing-masing obat

-Strip Test:  Celupkan strip test ke dalam urin sampai batas yang ditentukan ,Tunggu beberapa saat sesuai dengan petunjuk manual

- Card Test: Teteskan 3 tetes spesimen urin pada lubang spesimen yang ada  dalam  masing-masing card test, Tunggu beberapa saat sesuai dengan petunjuk manual

b. Pembacaan hasil

 Card Test:Hasil - (negatif...  bila tampak 2 garis pada huruf C dan T ,Hasil + (positif...  bila tampak 1 garis pada huruf C, Atau sesuai petunjuk manualnya

Strip Test : Hasil - (negatif...  bila tampak 2 garis pada huruf C dan T, Hasil + (positif...  bila tampak 1 garis pada huruf C,Atau sesuai petunjuk manualnya Pemilihan metode, peralatan dan  reagen untuk skrining harus  yang berpotensi batas deteksi sama atau lebih rendah dari batas deteksi (cut off...  yang disarankan  pada 

 Pemeriksaan skrining yang memberi  hasil negatif tidak dilanjutkan denganpemeriksaan konfirmasi.

Untuk pemeriksaan penyidikan atau penegakan hukum, pemeriksaan konfirmasi yang diakui yaitu  yang memakai  metoda GC-MS atau HPLC.

Untuk menjaga mutu pemeriksaan setiap 10 kali pemeriksaan spesimen urin dilakukan pemeriksaan minimal ada  1 pengendalian  urin positif dari jenis zat yang  diperiksa dan pengendalian  negatif (blanko urin).

 Bila hasil pemeriksaan Card atau Strip Test Positif belum menjamin + (positif...  untuk spesimen yang diperiksa, pemeriksaan harus dilanjutkan dengan uji konfirmasi.

SPEKTROFOTOMETRI

Bila senyawa diiradiasi dengan radiasi elektromagnetik dengan panjang gelombang yang  sesuai maka akan menyerap energi. Energi yang diserap ini dapat dipancarkan sebagai radiasi  pada panjang gelombang (lebih lama... yang lebih energik (fluoresensi atau pendar), terdisipasi  sebagai panas, atau memicu  reaksi fotokimia. Sinar gamma dan sinar X menempati 

spektrum panjang gelombang pendek (energi tinggi) dari spektrum. Urutannya yaitu  radiasi  ultraviolet (UV), visibel, inframerah dan gelombang mikro dan akhirnya, gelombang radio. Penyerapan berbagai jenis radiasi menghasilkan efek yang berbeda. Cahaya UV dan 

cahaya tampak mengeksitasi elektron dari keadaan dasarnya ke keadaan energi tinggi  (terekstitasi). Panjang gelombang () absorbansi maksimum dilambangkan maks. 

Radiasi inframerah (IR) menginduksi getaran molekul (ikatan), sedang  gelombang  mikro dipakai  untuk menginduksi transformasi putaran elektron dalam spektroskopi  reseptor spin elektron (ESR). Spektroskopi resonansi magnetik nuklir (nuclear magnetic 

resonance=NMR) memakai  panjang gelombang antara gelombang radio dan televisi  untuk mendeteksi putaran elektron nuklir.

Hukum Beer-Lambert

Dalam spektrometri UV atau sinar tampak (visible... , analit menyerap beberapa energi  cahaya masuk sebagai hasil elektron dalam molekul yang tereksitasi ke tingkat energi yang  lebih tinggi.bila  intensitas cahaya masuk yaitu  I0 dan energi cahaya yang ditransmisikan yaitu  I,  maka transmisi (T) yaitu :

Hukum yang mengatur hubungan antara intensitas cahaya yang masuk dan  meninggalkan sel yaitu  Hukum Beer-Lambert. Ini menyatakan bahwa, untuk larutan pelarut  yang menyerap dalam pelarut transparan, fraksi cahaya yang diserap sebanding dengan jumlah  molekul zat terlarut di lintasan cahaya (Hukum Beer) dan panjang lintasan (Hukum Lambert):

yang mana  I0 yaitu  intensitas cahaya yang terjadi, I yaitu  intensitas cahaya yang  ditransmisikan, c konsentrasi zat terlarut (mol L-1), ε yaitu  absorptivitas molar, yang  sebelumnya dinamakan koefisien kepunahan (L cm-1 mol-1), dan b yaitu  panjang 

lintasan (cm). Absorptivitas molar yaitu  ciri khas analit, namun juga bergantung pada suhu, panjang  gelombang dan pelarut. Absorbansi (a... berkaitan  linear dengan konsentrasi zat terlarut  dan panjang lintasan hanya untuk larutan encer. Dalam buku teks yang lebih tua itu dikenal  sebagai kepadatan optik (Od...  atau ekstinksi (e... , namun istilah ini sekarang sudah usang. 

Absorbansi khusus  (A1%, 1 cm) yaitu  absorbansi 1% larutan (w atau v) zat terlarut dalam sel  panjang sel 1 cm, dan biasanya ditulis dalam bentuk yang singkat= A1.  Beberapa factor pemicu  penyimpangan Hukum Beer-Lambert:

1. Konsentrasi analit

Perubahan indeks bias pada konsentrasi analit tinggi

Pada konsentrasi tinggi (> 0,01 mol L-1) interaksi elektrostatik antar spesies mengurangi  absorbansi

2. Interaksi atau adanya dekomposisi

3. Analit memisah atau bereaksi dengan pelarut

Penyerapan oksigen menjadi terbatas pada panjang gelombang di bawah 205 nm, Adanya partikel di celah cahaya,Phosphorescence atau fluoresensi pada specimen 

4. Instrumental

Efek cahaya menyimpang dari radiasi tercermin dalam monokromator yang mencapai pintu keluar celah menjadi lebih jelas pada absorbansi yang lebih tinggi.

. Polikromatik (tidak monokromatik) cahaya masuk. Lebar celah cahaya yang terbatas,  sehingga cahaya masuk lebih dari satu panjang gelombang. sebab  ε bervariasi dengan  panjang gelombang, ini memicu  penyimpangan dalam Hukum Beer. Untuk lebar 

celah yang ada variasi dalam ε akan lebih besar pada kemiringan puncak penyerapan  dibandingkan  maksimum, maka pengaruhnya berkurang dengan melakukan pengukuran  maksimal.

C. KROMATOGRAFI GAS

Kromatografi gas (gas chromatography=Gc...  berlaku untuk berbagai senyawa yang  menarik bagi ahli toksikologi, ahli kimia farmasi dan industri, ahli lingkungan dan dokter. bila   suatu senyawa memiliki volatilitas yang cukup untuk molekulnya berada dalam fase gas atau  uap pada atau di bawah 400°C, dan tidak terurai pada suhu ini, maka senyawa itu  dapat 

dianalisa  dengan GC.

1. Prinsip Kromatografi Gas

Pemisahan dilakukan dalam kolom (mengandung fase stasioner padat atau cair) yang  memiliki aliran fase gerak terus menerus yang melalui nya (biasanya gas pembawa inert),  namun baru-baru ini cairan superkritis (super critical fluid=SCFs) sudah  dipakai  untuk 

beberapa aplikasi], dipakai  dalam oven dengan suhu yang diatur. Bila campuran zat  diinjeksikankan pada saluran masuk, masing-masing komponen partisi antara fase diam dan .fasa gas akan dibawa ke arah detektor. Molekul yang memiliki afinitas lebih besar untuk fase  diam lebih lama tinggal di fase itu dan akibatnya butuh waktu lebih lama untuk mencapai 

detektor. Detektor menghasilkan sinyal yang sebanding dengan jumlah zat yang melalui nya,  dan sinyal ini diproses dan dimasukkan ke integrator atau perangkat perekam lainnya. Setiap  substansi yang mengelusi dari kolom memiliki waktu retensi (retension time=RT) karakteristik,  yang didefinisikan sebagai interval waktu dari tanggapan  injeksi ke puncak detektor.  Dalam toksikologi analitik, kromatografi gas (gas chromatography=Gc...  memiliki  beberapa  keunggulan dibandingkan metode  lain yang banyak dipakai  seperti HPLC dan  immunoassay. Pertama, GC memiliki berbagai detektor sensitif, seperti FID 'universal' dan 

detektor NPD, ECD dan MS selektif, yang dipakai  secara paralel. Kedua, stabil,  efisiensi tinggi, kolom (kapiler) GC sekarang banyak tersedia. Ketiga, GC mudah untuk 

berinteraksi dengan metode  yang memberi  informasi langsung tentang identitas senyawa  seperti spektrofotometri elektron-ionisasi MS (EI-MS) dan Fourier-transform inframerah (FTIR) 

Dengan GC, seperti HPLC, informasi kualitatif dan kuantitatif dapat diperoleh dalam  analisa  yang sama asalkan prosedur kalibrasi dan QC yang tepat diikuti. Pemrograman suhu  pada GC analog dengan elusi gradien pada HPLC, namun lebih mudah dilakukan dan 

memungkinkan analisa  senyawa volatile (mudah menguap) yang berbeda dalam satu analisa . 

juga , kembalinya ke keadaan  awal   mudah dan hubungan antara bobot molekul  (massa relative=Mr), waktu retensi dan suhu kolom   berharga dalam membantu  penetapan puncak di STA. juga , retensi data GC dapat diperoleh kembali pada hari, 

kolom, instrumen, operator yang berbeda. 

Keuntungan GC dalam toksikologi analitis

- Retensi data GC dapat diperoleh kembali pada hari, kolom, instrumen, operator yang  berbeda 

-Pemrograman suhu dan interfacing ke MS atau FTIR mudah - memerlukan beberapa jenis  kolom sebab  daya penyelesaiannya tinggi terutama dengan GC-MS

-Dapat menghasilkan spektrum EI dari GC-MS

-Indeks puncak utama berharga dalam identifikasi majemuk

-Dapat dipakai  untuk berbagai macam gas dan pelarut

-Dapat diinjeksikan campuran berair untuk beberapa aplikasi seperti etanol, dan berbagai senyawa volatil.

- Rentang kolom kapiler stabil dan efisien

-Tersedia detektor Sensitive universal (FId...  dan selektif (NPD, ECD, MS) detektor

-Bisa dipakai  untuk uji kualitatif dan kuantitatif

-Kolom kapiler lebar yang dipakai  dengan pelapis injeksi memudahkan kerja kuantitatif

- Hubungan antara waktu elusi, suhu kolom, dan bobot molekul berharga dalam uji kualitatif