narkotika 4

halaman  4

Keterbatasan metode GC antara lain:

Kekurangan GC mencakup persyaratan bahwa analit atau turunannya harus volatil dan  stabil pada suhu yang diperlukan  untuk analisa  (dalam prakteknya di bawah 400◦C atau  lebih). juga , zat dengan gugus fungsi yang   polar atau dapat diionisasi dapat 

memberi  kinerja yang buruk (luas, puncak tailing... , dan diperlukan preparasi specimen . Selain  itu, beberapa senyawa yang mungkin ada dalam ekstrak specimen  mungkin bersifat labil  pada  panas dan produk dekomposisi dapat mengganggu analisa . Jadi, selain pilihan  prosedur preparasi specimen , kolom dan keadaan  kromatografi dan pendeteksiannya, 

pertimbangan harus diberikan pada faktor lain termasuk pengumpulan dan penyimpanan  specimen , pilihan standar internal dan penjaminan mutu.   GC tetap menjadi  metode pilihan untuk gas dan volatil lainnya seperti etanol dan anestesi inhalasi. GC juga dapat  digabungkan dengan mass spectrophotometry (GC-MS) banyak dipakai  dalam analisa   senyawa lain, sebab  keuntungan utamanya yaitu  spektrum EI dapat diperoleh 

2. Peralatan

Biasanya sistem GC terdiri dari unit pengendalian  gas, yang memasok gas pembawa ke kolom  dan juga gas, seperti udara tekan dan hidrogen, ke detektor, sistem injeksi specimen , kolom  analisa , dan detektor dengan perolehan data yang terkait  Oven injektor, 

kolom dan detektor biasanya dipanaskan secara terpisah, detektor   dijaga pada  suhu yang lebih tinggi dibandingkan  suhu maksimum yang dicapai oleh oven kolom untuk  meminimalkan risiko fraksinasi atau kondensasi komponen specimen  dalam detektor. 

Pertimbangan yang sama berlaku untuk oven injector dalam operasi isothermal.

3. Preparasi specimen 

Sebelum dilakukan kromatografi, diperlukan isolasi senyawa target dari matriks  biologis (plasma, urin, isi perut, rambut dan jaringan) atau matriks lainnya, seperti tanah,  udara atau air. Penghilangan bahan asing dan pemekatan senyawa target biasanya terjadi 

secara bersamaan. Kelarutan air yang tinggi dari beberapa metabolit obat (contoh nya konjugat 

glucuronide...  memerlukan konversi kimiawi menjadi senyawa yang kurang polar untuk  memungkinkan isolasi dari specimen  berbasis air, dan prosedur hidrolisis sering dipakai  untuk  tujuan ini.

a. Presipitasi protein

bila  analit ada dalam darah dalam konsentrasi tinggi, langkah pengendapan protein  sederhana sering memberi  ekstrak yang sesuai, walaupun mungkin  kehilangan  beberapa  analit dengan endapan harus dipertimbangkan. Pencampuran dengan larutan 

merkuri klorida atau barium sulfat mudah mengendapkan protein plasma, dan sentrifugasi 

memberi supernatan untuk injeksi langsung ke kolom kromatografi. pemakaian asam  perklorat atau trikloroasetat (10%) tidak disarankan, kecuali larutan yang dihasilkan  dinetralkan sebelum diinjeksikan. Dimetilformamida yaitu  pereaksi presipitasi organik yang  baik yang ditoleransi dengan baik oleh sebagian besar fase stasioner GC. Agen  pengendapan organik lainnya yaitu  metanol, aseton dan asetonitril, yang semuanya harus  ditambahkan dalam proporsi dua jilid pada setiap volume darah. sedang  ekstraknya masih 

berbasis air, sebagian besar kolom dengan pemuatan fase stasioner tinggi (ketebalan lapisan  5 μm) dapat mentoleransi injeksi 1 μL air. bila  kolom tidak tahan pada  air, yaitu  mungkin  untuk menguap beberapa  kecil supernatan ke kekeringan untuk rekonstitusi dalam pelarut  yang lebih sesuai.

b. Ekstraksi cair – cair 

Ekstraksi cair-cairan yaitu  metode yang paling sering dipakai  untuk mengisolasi  dan mengkonsentrasikan larutan untuk GC. PH spesimen disesuaikan untuk memastikan agar  senyawa yang diekstraksi tidak terionisasi (dasar untuk basa, asam untuk senyawa asam).  Mengingat bahwa sebagian asam atau basa berair akan larut dalam pelarut, pemakaian asam 

mineral kuat atau alkali tidak disarankan sebab  ini  mempengaruhi kinerja kolom. Hasil  terbaik diperoleh dengan buffer asam (fosfat atau asetat) dan dengan ammonium hydroxide  atau buffer dasar (borat), dengan memakai  rasio pelarut 5: 1 pada  spesimen. Pelarut 

yang dipilih harus cukup polar untuk memisahkan senyawa yang diminati tanpa mengekstraksi 

ekstraksi kontaminan polar berlebihan. Untuk obat yang larut dalam air, seperti β-blocker,  penambahan 2 sampai 10% pelarut polar (contoh nya isopropanol atau butanol)    membantu, atau natrium klorida padat dapat ditambahkan ke 'salt out' analit. bila  langkah 

derivatisasi akan dilakukan lalu  , pemakaian pelarut yang kompatibel dengan  derivatisasi menghilangkan kebutuhan akan tahap penguapan. pemakaian pelarut dengan  densitas yang lebih tinggi dibandingkan  specimen  (contoh nya diklorometana... memicu   

kesulitan dalam mengisolasi fase organik. Pemurnian ekstrak dengan ekstraksi kembali  (ekstraksi ulang analit dari pelarut organik pada pH yang berlawanan diikuti dengan ekstraksi  ulang ke pelarut pada pH asli) dapat membantu untuk analisa  jejak. pemakaian pelarut  volume kecil untuk ekstraksi akhir berfungsi sebagai tahap konsentrasi tanpa kebutuhan 

pemisahan dan penguapan fasa organik.

c. Ekstraksi padat-cair atau padat

Ekstraksi cairan padat memakai  kartrid polipropilena dengan kemasan berbahan  dasar berkapasitas tinggi (1 sampai 20 mL) dengan basis kecil (200 mg sampai 3 g...  di dasar  waduk. Pada pengenalan matriks specimen , senyawa bunga ditahan oleh pengepakan. Kotoran 

lalu  dibilas secara selektif dari kolom, dan elusi terakhir melepaskan senyawa yang  diminati. Penguapan yang diikuti dengan rekonstitusi dalam pelarut yang sesuai memberi   specimen  konsentrat bersih yang siap untuk dianalisa  dengan GC. Paket fase berikat yang sudah  

direkayasa  dengan penambahan berbagai kelompok fungsional tersedia. Mekanisme  interaksi untuk matriks, analit dan kemasan mirip  dengan LC. Fase stasioner polar  mempertahankan analit polar (fasa normal) dan dielusi dengan pelarut organik, sedang  

fasa non-polar tetap mempertahankan analit non-polar (fase balik) dan dielusi dengan pelarut .berair. Ekstraksi ion-ion memakai  fase diam non polar dan analit polar, dengan ion  penghubung ditambahkan ke larutan specimen , dan memungkinkan retensi analit (sekarang 

netral) oleh mekanisme fase balik. Dalam ekstraksi pertukaran ion, permukaan adsorben  direkayasa  dengan fungsionalitas ionisable. Analitik dengan muatan ion yang berlawanan  dengan yang ada pada kemasan dipertahankan. Pelarut yang mengandung ion kontra dengan  kekuatan lebih besar dipakai  untuk mengeliminasi analit yang menarik dari tabung.

d. Ekstraksi mikro fase padat

Solid phase micro extraction (SPMe...  tidak memerlukan pelarut atau peralatan yang  rumit dan dapat memusatkan senyawa volatil dan non-volatil ke dalam specimen  cair dan gas.  Unit ini terdiri dari serat silika leburan yang dilekatkan pada plunger stainless steel yang  dilapisi dengan fase diam (dicampur dengan adsorben padat sesuai kebutuhan). Plunger  dimasukkan melalui septum ke dalam botol yang berisi specimen , dan serat yang terpapar .dengan menekan plunger ke dalam cairan atau headspace selama 20 sampai 30 menit.  Serabut yang ditarik dimasukkan ke port injeksi GC, dan didesorpsi saat plunger mengalami 

depresi. Unit dapat direkeadaan  dan dipakai  50 sampai 100 kali. Untuk analisa  lapangan,  specimen  yang teradsorpsi dapat disimpan dan diangkut dalam jarum yang disegel dalam tempat   khusus untuk analisa  lalu   oleh GC (atau Lc... . Pestisida yang ditemukan dari specimen  air  sudah  terbukti lebih stabil bila disimpan dengan cara ini dibandingkan  di dalam air. Pelapis injeksi  volume kecil khusus sesuai dengan model kromatografi apapun, dan menghasilkan puncak  yang lebih tajam sebab  kecepatan gas linier yang lebih tinggi, dengan sedikit atau tanpa 

rontok. Fasa stasioner yang sesuai yaitu :

-100 μm dimetil-film PSX untuk senyawa dengan berat molekul rendah atau volatil, atau  film tipis (7 μm) untuk senyawa semivolatile berat lebih besar

-85 μm film poliakrilat untuk senyawa polar

- 65 μm film dimetil-PSX-divinil benzena untuk alkohol dan amina yang mudah menguap untuk surfaktan, resin Carbowax-templated 50 μm,untuk senyawa volatil, fase Carbowax-carboxen 75 μm   sesuai.Pendekatan alternatif memakai  batang pengaduk magnet kecil yang dienkapsulasi dalam kaca dan dilapisi dengan lapisan dimetil-PSX. Batang dibiarkan  mengaduk dalam specimen  selama 30 sampai 120 menit dan lalu  dilepaskan dan  ditempatkan  dalam tabung desorpsi termal. Dari situ, disambungkan ke GC bagian 

injector desorpsi termal. Kedua pendekatan itu  memberi  kinerja yang sama  untuk senyawa dengan pemanasan yang lebih tinggi (> 350°c... , sedang  SPME lebih  rendah untuk senyawa dengan pemanasan rendah seperti naftalena dan fluorena (masing-masing 218 dan 298°c...  ,

4. Aplikasi kromatografi gas dalam toksikologi analitik

a. Jaringan dan rambut

Jaringan dan rambut memerlukan treatment sebelum ekstraksi obat untuk memecah  matriks biologis. Untuk jaringan padat, hasil yang baik diperoleh dengan menginkubasi  sebagian jaringan dengan campuran kolagenase, protease dan lipase dalam buffer pH yang 

sesuai. Untuk beberapa  kecil jaringan (100 mg... , perendaman semalam pada suhu kamar,  agitasi ringan atau sesekali pencampuran mempercepat prosesnya. Untuk analisa  rambut,  pencucian awal untuk menghilangkan residu dari produk kosmetik atau kontaminan lingkungan disarankan , dilanjutkan dengan inkubasi dengan alkali kaustik (untuk obatobatan basa... atau asam mineral (untuk obat asam). sesudah  penyesuaian pH, dilanjutkan dengan prosedur biasa yang ditetapkan untuk senyawa khusus  yang sedang diperiksa.

1) Hidrolisis

Penemuan metabolit obat terkonjugasi dari cairan biologis dapat ditingkatkan dengan  penguraian hidrolitik ikatan konjugasi sebelum ekstraksi. Ini menawarkan peningkatan  peka yang besar untuk analisa  kualitatif, terutama dari urin, dan   perlu untuk 

mengidentifikasi obat (contoh nya pencahar) yang diekskresikan hampir secara eksklusif  sebagai metabolit terkonjugasi. Namun, analisa  kuantitatif yang diandalkan untuk  metabolit terkonjugasi mensyaratkan bahwa metabolit yang tidak terkonjugasi pertama-tama  harus dihilangkan atau diukur, dan lalu  metabolit total (terkonjugasi plus tidak  terkonjugasi) diukur sesudah  hidrolisis dalam prosedur terpisah berikutnya. 

2) Hidrolisis enzimatis

pemakaian enzim khusus  untuk menguraikan ikatan kimia lebih khusus  memicu  biaya dan waktu tambahan. Proses menghasilkan ekstrak bersih, dan sebab  itu  memperpanjang usia  kolom kromatografi. Ada beberapa  preparat komersial glukoronidase 

murni dan sulfatase. perlu untuk memperhatikan pH dan suhu optimal dari preparasi enzim  tertentu. Sediaan tahan panas memungkinkan pemanasan sampai 60°C, yang memungkinkan  waktu inkubasi yang relatif singkat (2 jam).

3) Hidrolisis kimia

Pendekatan yang lebih cepat dan lebih murah ini dapat memberi  ekstrak yang  sesuai untuk kromatografi untuk beberapa analit. Biasanya, asam mineral kuat atau alkali  dipakai , sering  dengan pemanasan atau perlakuan dalam microwave atau pressure  cooker. Ekstrak harus dinetralisir, bila  tidak akan merusak kolom kromatografi. Perhatian  harus diberikan untuk memastikan stabilitas analit pada  keadaan  hidrolisis. keadaan   hidrolisis yang kuat sering menghasilkan produk sampingan yang tidak diharapkan  , atau bila  

beberapa senyawa dapat dihidrolisis menjadi satu kesatuan, hindari identifikasi akurat dari  senyawa asli yang ada. contoh: , asam dan hidrolisis enzimatik benzodiazepin  menghilangkan konjugat glukuronida, namun hidrolisis asam juga mengubah dua atau tiga 

obat ke senyawa benzofenon yang sama (diazepam, temazepam dan ketazolam semuanya  diubah menjadi 2-methylamino-5-chlorobenzophenone...  ,

b. analisa  Sianida dan CO

Kromatografi gas memiliki kelebihan dibandingkan metode spektrofotometri untuk  analisa  karbon monoksida, terutama bila  darah dan jaringan postmortem yang terurai parah  harus dianalisa . Namun, sebab  kepekaan untuk karbon monoksida oleh FID   buruk,  pemakaian detector TCD (thermal conductivity detector) atau reduksi analit dengan

hidrogen pada katalis Ni yang dipanaskan untuk menghasilkan metana sebelum pemakaian 

FID harus dilakukan. Prosedur yang terakhir ini memerlukan langkah tambahan, dan  memerlukan  peralatan non-standar. Dengan pengembangan detektor ionisasi helium  discharge (He-PDPId...  dimungkinkan untuk mengukur karbon monoksida secara langsung  dengan peka yang baik. Helium   dipakai  sebagai gas pembawa dan sebagai 

spesies terionisasi , Konsentrasi sianida darah sudah  diukur dengan GC-NPD memakai  asetonitril 

sebagai standar internal sesudah  penambahan asam fosfat ke specimen  dalam botol headspace.  Uji kalibrasi kalibrasi dilakukan dengan penambahan larutan potassium sianida pada darah  kita  alkalin. Ruang lingkup pengenceran isotop-GC-GC memakai  K13 C15 N atau C2  H3 CN sebagai standar internal juga sudah  dipakai ,

c. Pengukuran etanol dan senyawa volatil lainnya

Metode GC-FID paling awal untuk pengukuran etanol darah melibatkan pengenceran  specimen  secara sederhana (seluruh darah, plasma atau urin) (50 mL) dengan larutan standar  internal (0,16 g propanol atau L dalam air, 500 mL) diikuti pencampuran dengan vortex (10 detik)  dan injeksi langsung campuran hasil ke dalam kolom yang dikemas dengan saringan molekuler 

seperti Chromosorb 102. Senyawa volatil lain seperti metanol, 2-propanol dan aseton, sudah   diatasi dan dapat diukur bila  diperlukan. Bahan karbon hitam yang direkayasa  juga dapat dipakai .  Saat ini, sampling headspace statis dikombinasikan dengan GC yang diprogram pada  kolom kapiler PDMS dan deteksi ganda (ECD  atau  FId...  dapat dipakai  untuk menyaring tidak  hanya etanol, metanol dan 2-propanol, namun  juga untuk berbagai macam senyawa volatil 

lainnya dalam cairan biologis. Sebagai alternatif sistem split injection atau dual column (PDMSPEg...  dapat dipakai . Tabung seharusnya hanya dibuka saat diperlukan  untuk analisa , dan  pada suhu dingin (4◦c... . Antikoagulan (lithium heparin atau EDTa... harus dipakai , seperti  pada metode lain yang mana  seluruh darah harus diuji. bila  volume specimen  terbatas disarankan 

untuk memilih tempat  yang sesuai dengan volume darah sehingga ada headspace minimal.  Penyimpanan spesimen antara -5 dan 4◦C disarankan  dan sodium fluorida (2% b atau v)  harus ditambahkan untuk meminimalkan metabolisme mikroba. Pada dugaan masalah  kematian  terkait penyalahgunaan obat, analisa  jaringan seperti otak atau paru-paru mungkin terbukti  bermanfaat sebab  konsentrasi senyawa volatil yang relatif tinggi muncul bahkan saat   tidak ada yang terdeteksi dalam darah , Alkil nitrit yang sering disalahgunakan dengan menghirup amil nitrit yaitu  masalah   khusus: (i)   tidak stabil secara in vivo dan dihidrolisis dengan cepat ke alkohol yang 

sesuai dan (ii) biasanya juga mengandung isomer lain (butil nitrit, pentil nitrit). Setiap produk  yang diajukan untuk analisa  biasanya mengandung alkohol dan juga nitrit organik. Propanol  dan butanol juga dapat muncul , contoh nya dengan aksi  mikroba dari penyusun darah normal secara in vitro dan maka  diperlukan kehati-hatian dalam menafsirkan hasil  pada masalah  yang mana  senyawa ini terdeteksi ,

D. KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI (KCKT)

Dasar  Kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) atau lazim dinamakan  HPLC (high performance  liquid chromatography)   sesuai untuk analisa  senyawa hidrofilik, termolabil dan atau  bobot molekul (massa relative=MR) tinggi. Dalam analisa  obat dan racun lainnya,  HPLC memiliki kelebihan praktis fleksibilitas,   biaya operasional rendah, kisaran  detektor selektif, yang biasanya dapat dihubungkan secara seri, dan kemudahan otomasi. Sifat  ini sering dapat dimanfaatkan untuk memudahkan analisa  beberapa senyawa (contoh nya obat  dan metabolit) sekaligus. pemakaian utama HPLC meliputi riset  farmakokinetik dan  metabolik, pengukuran konsentrasi obat dalam serum yang diberikan dalam terapi  (therapy drugs monitoring=TDM), dan pemantauan paparan bahan toksik. Keuntungan HPLC dalam toksikologi analitis

 Relatif mudah untuk mengotomatisasi ,antikonvulsan, benzodiazepin, kafein dan xanthine lainnya dan analit  yang polar seperti katekolamin, obat asam, netral atau lemah, dianalisa  pada sistem fase 

balik. Dalam masalah  xanthine, disarankan penambahan THF ke eluen untuk memastikan 

pemisahan metabolit paraxanthine dan teofilin.

KCKT atau HPLC sudah  menggantikan spektrofotometri UV-visible dan GC untuk 

pengukuran analit dan metabolit khusus , terutama bila disesuaikan dengan selektivitas dan  kepekaan yang ditawarkan oleh Mass Spectrophotometry (MS). Namun, kelebihan HPLC,  fleksibilitas yang ditawarkan oleh kemampuan untuk merekayasa  eluen, juga yaitu  kelemahan terbesarnya dalam pemakaian rutin. Pembentukan kolom tidak hanya diubah,  dikompresi, atau diubah secara fisik, namun  juga kontaminan dapat tertimbun  di bagian atas  atau dalam kolom, yang memicu  hilangnya kinerja. pemakaian filtrasi eluen dan kolom  pra-atau buffer dapat membantu memperpanjang usia  kolom. Keterbatasan dasar yaitu   bahwa tidak ada detektor HPLC universal yang sensitif yang mirip  dengan FID pada GC dan  kedua bahwa tidak ada paralel dalam HPLC-MS seperti EI dalam GC-MS.. Pemisahan yang cepat dan efisien, selektivitas dapat dikendalikan dengan memilih eluen,analisa  molekul polar dengan BM tinggi yang tidak dapat dilakukan dengan KG,Sensitif, selektif, detektor non-destruktif (UV, fluoresensi) yang bisa dipakai  secara seri

 Dapat digabungkan dengan MS-ESI, APCI, deteksi yang   selektif untuk analit yang  ditargetkan, Dapat diinjeksikan specimen  berair (namun  selektivitas berkurang dibandingkan dengan  contoh nya ekstrak pelarut),Peralatan portable, tidak diperlukan gas, oven suhu tinggi, dan sebagainya,

. Peralatan

Sistem HPLC terdiri dari reservoir eluen, pompa bertekanan tinggi (atau pompa dengan  sistem gradien pencampur bertekanan tinggi) dengan flow controller, sistem injeksi specimen ,  pelindung stainless steel dan kolom analisa  yang dikemas dengan bahan fase stasioner,  sebuah detektor, dan sistem pengambilan data Detektor biasa   dipakai  dalam toksikologi analitiK yaitu  UV- visible, termasuk diode array (DAd... , 

fluoresensi, elektrokimia (Ed...  dan spektrometri massa (MS). Jantung dari sistem yaitu  kolom  di mana pemisahan terjadi. sebab  fasa diam terdiri dari partikel berpori berukuran  mikrometer, pompa tekanan tinggi diperlukan untuk memindahkan fasa gerak melalui kolom.  Proses kromatografi dimulai dengan menyuntikkan zat terlarut ke bagian atas kolom. 

Pemisahan komponen terjadi sebab  analit dan fase gerak dipompa melalui kolom. Akhirnya,  setiap komponen mengelusi dari kolom dan terdaftar sebagai puncak pada perekam. Deteksi  komponen eluting perlu; Ini bisa jadi selektif atau universal, tergantung detektor yang  dipakai . tanggapan  detektor pada masing-masing komponen ditampilkan pada perekam grafik 

atau layar komputer dan dinamakan kromatogram. Untuk mengumpulkan, menyimpan  dan menganalisa  data kromatografi, komputer, integrator dan peralatan pengolahan data  lainnya sering dipakai .

3. Mekanisme HPLC

Sistem yang dipakai  dalam kromatografi ada empat tipe mekanisme yaitu: adsorpsi,  partisi, pertukaran ion dan eksklusi ukuran. Kromatografi adsorpsi muncul  dari interaksi antara zat terlarut dan permukaan fase stasioner padat.  , eluen yang dipakai  untuk  kromatografi adsorpsi kurang polar dibandingkan  fase diam dan sistem seperti itu dijelaskan   sebagai fase normal. Kromatografi partisi melibatkan fasa stasioner cair yang tidak bercampur  dengan eluen dan dilapiskan pada pendukung inert. Sistem partisi dapat berupa fase normal  (fase diam lebih polar dari eluen) atau kromatografi fase terbalik, dinamakan  reverse phase 

chromatography atau RPC (fase diam kurang polar dibanding eluen). Kromatografi pertukaran 

ion melibatkan fase stasioner padat dengan gugus anionik atau kationik pada permukaan,  yang mana  molekul zat terlarut memiliki muatan berlawanan akan ditarik. Kromatografi dengan  eksklusi ukuran melibatkan fase stasioner padat dengan ukuran pori terkendali. Solutes  dipisahkan sesuai dengan ukuran molekulernya, molekul besar tidak bisa masuk ke pori-pori  elusi terlebih dahulu. Namun, prinsip  empat mode pemisahan ini terlalu menyederhanakan. faktanya , tidak ada batas yang berbeda dan beberapa mekanisme yang berbeda  sering beroperasi secara bersamaan.

4. analisa  Kuantitatif

Metode kuantifikasi yang tergabung dalam KCKT kebanyakan berasal dari metode KG.  Teori dasar untuk kuantifikasi melibatkan pengukuran ketinggian puncak atau area puncak.  Untuk menentukan konsentrasi senyawa, luas puncak atau tinggi diplotkan dibandingkan  konsentrasi zat , Kurva yang baik, tinggi puncak dan luasnya sebanding dengan  konsentrasi. Tiga metode kalibrasi yang berbeda, masing-masing dengan manfaat dan  keterbatasannya sendiri, dapat dipakai  dalam analisa  kuantitatif, standar eksternal, 

standar internal dan metode penambahan standar.

- Standar internal

walau  setiap metode efektif, metode standar internal cenderung menghasilkan  hasil yang paling akurat dan tepat. Dalam metode ini, jumlah yang sama dari standar internal,  komponen yang tidak ada dalam specimen , ditambahkan ke specimen  dan larutan standar. Standar  internal yang dipilih harus secara kimiawi mirip dengan analit, memiliki waktu retensi yang  dekat dengan analit dan derivatisasi dengan cara yang sama dengan analit. Untuk specimen  

biologis, standar internal harus diekstraksi sama dengan analit tanpa bias menonjol  pada   standar internal atau analit. juga , perlu untuk memastikan bahwa standar internal  stabil dan tidak mengganggu komponen specimen . Standar internal harus ditambahkan sebelum  persiapan specimen  sehingga efisiensi ekstraksi dapat dievaluasi. Kuantifikasi dicapai dengan  memakai  rasio tinggi puncak atau luas komponen pada  standar internal, 

𝒂-. Penambahan standar (spike... . 

Ini   bermanfaat  bila ada masalah dengan gangguan dari matriks specimen , sebab  ini  menghilangkan efek ini. Untuk melakukan kuantifikasi ini, specimen  dibagi menjadi dua bagian,  sehingga jumlah analit (spike...  yang diketahui dapat ditambahkan ke satu bagian. Kedua  specimen  ini, asli dan asli-plus-spike, lalu  dianalisa . specimen  dengan spike menandakan  

tanggapan  analitis yang lebih besar dibandingkan  specimen  asli sebab  jumlah analit tambahan yang 

ditambahkan padanya. Perbedaan tanggapan  analitis antara specimen  dengan spike dan tidak  diolah berasal dari jumlah analit dalam spike. Ini memberi  titik kalibrasi untuk menentukan

konsentrasi analit dalam specimen  aslinya. Metode ini memiliki kekurangan bila  hanya beberapa  

kecil specimen  yang tersedia. Persamaan berikut dipakai  untuk metode ini:

perlu untuk memakai  metode HPLC yang sudah  divalidasi saat melakukan  analisa . Karakteristik analisa  khas yang dievaluasi dalam validasi HPLC dapat meliputi  ketepatan, akurasi, spesifisitas, batas deteksi, batas kuantifikasi, linieritas dan range. 

- Metode Standar Eksternal

Metode standar eksternal yaitu  metode yang paling sederhana dari ketiga metode  itu . Keakuratan metode ini bergantung pada reproduktifitas injeksi volume specimen .  Untuk melakukan metode ini, larutan standar konsentrasi senyawa yang diketahui sudah

dipersiapkan. Jumlah yang tetap, yang seharusnya mirip  konsentrasi dengan yang tidak  diketahui, disuntikkan. Tinggi puncak atau luas diplot versus konsentrasi untuk masing-masing  senyawa. Plot harus linier dan melalui  titik asal. Konsentrasi yang tidak diketahui lalu   ditentukan berdasar  persamaan 

Konsentrasi kalibrator harus mencakup kisaran konsentrasi yang mungkin terjadi pada specimen  

yang tidak diketahui. Hanya konsentrasi yang dibaca dalam tingkat kalibrasi tertinggi dan  terendah yang diterima. Konsentrasi yang dibaca dari garis regresi ekstrapolasi mungkin  tidak akurat. Ini berlaku untuk semua metode kuantifikasi.

NARKOTIKA 

 yaitu  obat untuk menenangkan saraf,  menghilangkan rasa sakit, memicu  rasa mengantuk, atau merangsang (seperti opium,  ganja). Narkotika berasal dari kata narkose (Yunani) yang artinya menidurkan atau membius,  namun demikian narkotika bukan obat bius. Narkotika menekan saraf pusat sehingga 

menghasilkan efek penurunan peka pada  rasa sakit dan aktivitas fisik, memicu   rasa kantuk. Narkotika dapat berasal dari bahan alami seperti golongan opium, dan sintetis. Narkotika sintetis antara lain: fentanyl, metadon, dekstropropoksifen, pethidin. 

B. GANJA

1. Asal dan penggolongan  Ganja

Ganja yaitu  tanaman yang termasuk dalam family Cannabaceae, kadang dikenal  sebagai Cannabinaceae.  , ganja dianggap mono- khusus  (Cannabis sativa L.) yang  dibagi menjadi beberapa subspesies antara lain (C. sativa subsp. sativa, C. sativa subsp. Indica, 

C. sativa subsp. ruderalis, C. sativa subsp. spontanea, C. sativa subsp. kafiristanca). Namun,  perbedaan kimia dan morfologis yang mana  ganja sudah  terpecah menjadi subspesies ini sering   tidak mudah terlihat, tampaknya akibat modifikasi lingkungan, dan bervariasi secara terusmenerus .  sebab  itu cukup dinamakan  Cannabissativa untuk semua jenis tanaman ganja. Ganja yaitu   tanaman tahunan, tegak, bervariasi dari 0,2-6 m, sebagian besar 1-3 m, bercabang, berbunga,   Nama dan sinonim produk kanabis: bhang, Cannabis indica, chanvre, charas, dagga, ganja, guaza, hashish, mariyuana, marihuana  . Marijuana biasanya mengarah pada campuran daun dan bagian atas bunga begitu juga dengan bhang, dagga, kif, maconha.  Hashish dan charas biasanya berupa resin. Sinonim lain dapat dicari di The Multilingual Dictionary of Narcotic Drugs dan Psychotropic Substances under International Control.

A. Inflorescence tanaman jantan (staminate... 

B. Buah betina (pistillate... : 1 Staminate flower, 2 Stamen (antera dan filamen pendek), 3  benang sari, 4 Biji serbuk sari, 5 bunga pistillate (betina... dengan bract, 6 Bunga pistillate tanpa bract, 7 Bunga pistillate yang menandakan  ovarium (membujur), 8  Benih (achen *) dengan bract, 9 Benih tanpa bract, 10 Benih (dari samping... , 11 (melintang... , 12 Benih (membujur), 13 Benih tanpa pericarp (dikupas)

C. Bentuk herbal ganja

Kanabis mengandung lebih dari 60 derivat dari 2-[2-isopropyl-methylphenyl]-5- pentylresorcinol dinamakan  kanabinoid. Kanabis mengandung campuran bervariasi zat  kimia dinamakan  kanabinoid. Empat kandungan mayor yaitu  :

. ∆-9-tetrahydrocannabinol (THc... ,. Cannabinol (CBN),,Cannabidiol (CBd... , Cannabichromene(CBCh),

Kandungan THC bervariasi tergantung pada bagian tanaman: 10-12% pada bunga pistillat  (betina), 1-2% pada daun, 0,1-0,3% pada tangkai dan <0,03% di akar. Tetrahydrocannabinol  (THc...  yaitu  kanabinoid yang paling memicu  efek psikologik dari produk kanabis. 

Bentuk-bentuk kanabis :

a. Marijuana (produk herbal)

Kanabis tumbuh di area  4 musim Eropa: Amerika Utara, Afrika Utara, Afrika Barat dan Karibea, Afrika Tengah, Afrika Selatan, Amerika Selatan, Dataran India, Asia Tenggara. Tanaman berwarna hijau terang, sesudah  dipanen menjadi kekuningan namun  jarang berwarna 

coklat, bagian bunga dan buah sebelah atas kurang mengandung resin, jadi tidak   lengket, kadang  mengandung biji, kanabis dari Eropa mengandung lebih banyak daun dari 

kanabis Amerika Utara. Karakteristik kimia bervariasi biasa dengan atau tanpa CBD dan THCV 

(tetrahydrocannbivarin).

b. Produk Resin Kanabis

Berasal dari Afrika Utara, Mediterania Timur, Mediterania Timur Laut, India.Afrika Utara: Potongan (slab...  berwarna kuning coklat, terbungkus selofan kadang  ada  cetakan bentuk koin. Karakteristik kimia: kandungan CBC lebih rendah dibanding THC, 

THCV   rendah. Jumlah asam kanabinoid bervariasi antar produk. Mediterania Timur: bubuk berwarna coklat kemerahan. Karakteristik kimia: Kandungan CBD 

paling besar dibanding produk kanabis resin lain. Asam sebagian besar yaitu  CBDA. Mediterania Timur Laut: bubuk coklat kehijauan atau kadang  bentuk mirip wafer kecil tipis  terbungkus selofan. Karakteristik kimia: THC lebih banyak dari CBD. ada  kandungan  asam dalam jumlah besar. Dataran India: bentuk dapat berupa slab atau batangan berwarna coklat gelap atau hitam dan 

hijau gelap atau coklat tua.

c. Kanabis Cair (hashish oil)

Kanabis cair yaitu  minyak berwarna gelap dengan bau khas. saat  diencerkan  dengan pelarut organik menjadi larutan berwarna hijau atau coklat. Karakteristik kimia: 

profil kanabinoid mirip dengan kanabis atau resin kanabis namun  punya satu perbedaan  perlu yaitu kanabis cair tidak mengandung asam kanabinoid.

Kandungan THC yang biasa ada  dalam : kanabis herbal : 0,5-5 % ; kanabis resin : 2-10 % ; kanabis cair : 10-30 %

Jumlah itu  hanya panduan, faktanya  produk yang ditemukan mengandung jumlah yang jauh lebih tinggi. ∆9

-THC berpotensi efek psikomimetik 20 kali

lebih kuat dari ∆8

-THC. ∆9

-THC mudah terikat dengan gelas dan plastik, mengurangi  perolehan kembali (recovery) pada proses analisa , ini  dapat diminimalisasi dengan 

pemakaian peralatan gelas amber dan penyimpanan senyawa dalam larutan standar (basic... 

atau pelarut organic ,

2. Mekanisme kerja 

Ganja biasanya dipakai  dengan cara dihisap atau sebagai rokok. Ganja yang masuk  ke saluran pernapasan sesudah  melalui hidung atau mulut, sampai ke tenggorokan, terus ke  bronkus, lalu  masuk ke paru-paru melalui bronkiolus dan berakhir di alveolus. Di dalam alveolus, butiran   debu   zat aktif itu diserap oleh pembuluh darah kapiler, lalu  dibawa 

melalui pembuluh darah vena ke jantung. Dari jantung, zat aktif disebar ke seluruh tubuh. Tetrahydrocannabinol (THc... , bahan aktif utama dalam ganja, mengikat dan  mengaktifkan reseptor khusus , yang dinamakan reseptor cannabinoid. Ada banyak 

reseptor ini di bagian otak yang mengendalikan ingatan, pikiran, konsentrasi, persepsi waktu  dan kedalaman, dan gerakan terkoordinasi. Dengan mengaktifkan reseptor ini, THC  mengganggu fungsi normal mereka.

Cerebellum yaitu  bagian otak yang terlibat dalam keseimbangan, postur tubuh, dan  koordinasi gerakan. Cerebellum mengkoordinasikan aksi  otot yang dipesan oleh korteks  motor. Impuls saraf mengingatkan serebelum bahwa korteks motor sudah  mengarahkan bagian  tubuh untuk melakukan aksi  tertentu. Hampir sesaat , dorongan dari bagian tubuh  itu  menginformasikan cerebellum tentang bagaimana aksi  dilakukan. Cerebellum  membandingkan gerakan sebetulnya  dengan gerakan yang dimaksud dan lalu  

menandakan korteks motor untuk melakukan koreksi yang diperlukan. Dengan cara ini,  serebelum memastikan tubuh bergerak dengan lancar dan efisien.

Hippocampus terlibat dengan formasi memori. riset  menandakan  bahwa ganja  mempengaruhi memori dengan mengurangi aktivitas neuron di area  ini. sebab  

hippocampus terlibat dalam formasi memori baru, pasien   yang berada di bawah pengaruh ganja akan mengalami gangguan ingatan jangka pendek, dan pembelajaran baru mungkin  terganggu. Namun, sebagian besar penelitian pada kita  menandakan  bahwa bila   pasien   berhenti memakai  ganja, kemampuan ingatan mereka dapat pulih.Ganja juga mempengaruhi area otak yang bertanggung jawab atas persepsi sensorik (contoh nya sentuhan, penglihatan, pendengaran, rasa, dan bau) di korteks serebral. Sebagian  besar informasi sensorik yang berasal dari tubuh disalurkan melalui thalamus, dan lalu  

ke area  korteks serebral yang tepat. contoh nya, korteks somatosensor menerima pesan yang  ditafsirkan sebagai rasa  tubuh, seperti sentuhan. Korteks somatosensori terletak pada  lobus parietal di setiap belahan bumi. Korteks somatosensori diatur sedemikian rupa sehingga  seluruh tubuh terwakili, sehingga bisa menerima dan secara akurat menafsirkan impuls dari  bagian tubuh tertentu. Bagian khusus lainnya dari korteks serebral menerima impuls sensorik  yang berkaitan  dengan melihat, mendengar, merasakan, dan mencium. Impuls dari mata 

bergerak di sepanjang saraf optik dan lalu  diteruskan melalui talamus ke korteks visual  di lobus oksipital. Bagian dari lobus temporal menerima pesan pendengaran dari telinga. Area  untuk rasa berada di celah lateral, yang memisahkan lobus frontal dan temporal. Pusat bau  ada di bagian bawah lobus frontal, bau yaitu  satu-satunya indera yang tidak diteruskan 

melalui thalamus. Saraf olfactory membawa informasi ini melalui  pusat pencium dan  langsung ke korteks. Marijuana mengaktifkan reseptor cannabinoid di berbagai area  korteks ini, yang memicu  persepsi sensoris yang berubah yang dialami pemakai  di bawah  pengaruhnya.  Efek akut ganja bervariasi, termasuk tertawa dan cekikikan, peningkatan nafsu makan, 

perubahan persepsi dan mood, dan efek stimulan atau sedatif. Dengan dosis yang    besar, pasien mungkin juga mengalami halusinasi, kegelisahan, paranoid, kekurangan memori  jangka pendek, dan gaya berjalan yang tidak stabil. pemakaian ganja secara intravena dapat  memicu  kolaps kardiovaskular, koagulopati intravaskular diseminata, atau kematian. 

Penurunan memori dan perhatian sudah  dikaitkan dengan pemakaian ganja jangka panjang  rasa  euphoria ringan, relaksasi, dan persepsi pendengaran dan visual yang diperkuat  dihasilkan oleh ganja berpengaruh pada reseptor cannabinoid di otak. Reseptor ini ada  di  seluruh otak, dan molekul endogen yang mengikatnya secara alami sudah  diidentifikasi yaitu  anandamide. Anandamide terlibat dalam mengatur mood, memori, nafsu makan, rasa sakit, 

kognisi, dan emosi. saat  ganja dimasukkan ke dalam tubuh, bahan aktifnya, Delta-9- tetrahydrocannabinol (THc...  dapat mengganggu semua fungsi ini. THC memulai proses ini dengan mengikat reseptor CB1 untuk anandamida. Reseptor  ini lalu  merekayasa  aktivitas beberapa enzim intraselular, termasuk cAMP, yang  aktivitasnya menguranginya. Kurangnya cAMP berarti kurang protein kinase A. Aktivitas enzim 

yang berkurang ini mempengaruhi saluran kalium dan kalsium sehingga mengurangi jumlah  neurotransmiter yang dilepaskan. Rangsangan umum jaringan saraf otak juga berkurang. Namun, pada rangkaian sistem sumber , lebih banyak dopamin dilepaskan. Seperti 

halnya opiat, peningkatan paradoks ini dijelaskan oleh fakta bahwa neuron dopaminergik di  sirkuit ini tidak memiliki reseptor CB1, namun biasanya dihambat oleh neuron GABAergik yang  memilikinya. Ganja menghilangkan penghambatan ini oleh neuron GABA dan sebab nya  mengaktifkan neuron dopamin.

Pada pengkonsumsi ganja kronis, hilangnya reseptor CB1 di arteri otak mengurangi  aliran darah, dan sebab nya menurunkan glukosa dan oksigen ke otak. Hasil utamanya yaitu   defisit perhatian, kehilangan ingatan, dan kemampuan belajar terganggu  

3. Toksokinetik Ganja

Data Farmatokinetik,Disposisi dalam Tubuh 

D9-THC diserap dari saluran pencernaan namun  penyerapannya lambat dan tidak  teratur. Namun, D9-THC dapat diukur dalam plasma dalam hitungan detik sesudah   menghirup asap ganja pertama. D9-THC bersifat lipofilik dan tersebaran    di dalam tubuh. D9-THC dioksidasi menjadi metabolit aktif 11-hidroksi-D9-THC dan 8bhidroksi-D9-THC oleh enzim cytochrome P450 hati. Zat tidak aktif 8a-hidroksi-D9-THC dan 

8a, 11-dihidroksi-D9-THC juga terbentuk. muncul sirkulasi metabolit enterohepatik.  Metabolit asam mayor, 11-nor-∆-9-tetrahydrocannabinol-9-carboxylic acid (9-carboxyTHc...  diubah menjadi konjugat mono dan di-glukoronida yaitu   bentuk  terbanyak yang dikeluarkan dalam urin. Sehingga identifikasi 9-carboxy-THC dalam urin yaitu  indikator terbaik untuk mendeteksi konsumsi kanabis. Waktu paruhnya panjang dapat lebih dari 20 jam sehingga THC ada  dalam  tubuh dalam waktu lama sampai 12 hari sesudah  konsumsi terakhir. Pada pemakai  yang 

jarang, metabolit dapat terdeteksi dalam urin dalam 1-3 hari tergantung dari metode  pemeriksaan, pada pemakai  kronis, metabolit dapat terdeteksi 1 minggu atau lebih. Jalur metabolic THC

c. Ekskresi

Hampir 25% dari dosis diekskresikan melalui urin dalam 3 hari, terutama sebagai glucuronide asam 11-nor-D9-THC-9-carboxylic, bersama-sama dengan bentuk karboksilat  dalam bentuk bebas dan terkonjugasi. D9-THC-O-glucuronide juga terdeteksi dalam urin.  Ditemukannya asam karboksilat dalam urin menandakan  indikasi positif pemakaian 

kanabis yang baru saja dilakukan. Rute ekskresi utama yaitu  melalui faeces, sampai  sekitar 65% dari dosis diekskresikan dalam 5 hari, terutama sebagai 11-hidroksi-D9-THC  dan karboksilat dalam bentuk terkonjugasi. Metabolit D9-THC terdeteksi dalam urin 

hingga 12 hari sesudah  dosis oral tunggal. Senyawa ini dapat melintasi plasenta dan  disebarkan  ke dalam ASI.

4. analisa  Ganja dalam Cuplikan Herbal, Resin dan Hashis Oil Kriteria minimal untuk identifikasi positif ganja Bagian berikut menjelaskan beberapa  metode untuk pemeriksaan dan analisa  produk ganja. Pilihan metodologi dan pendekatan analisa  dan  keputusan apakah  diperlukan metode tambahan bergantung pada ketersediaan instrumentasi yang sesuai dan tingkat bukti legal yang diterima secara hukum di area  analis 

bekerja. Untuk produk ganja yang menandakan  karakteristik botani, kombinasi uji  warna, kromatografi lapis tipis dan pemeriksaan fisik (makroskopis dan mikroskopis) dianggap sebagai pendekatan analitik minimum yang diterima untuk identifikasi  positif.

a. Uji Makroskopis

Karakteristik morfologi dan variasi warna tanaman ganja dipengaruhi oleh strain benih dan juga oleh faktor lingkungan seperti cahaya, air, nutrisi dan area  tumbuh.

Sebagai ramuan dioecious, bunga pada tanaman personal  bersifat uniseksual,  namun sering  ada bunga peralihan dan bunga dari lawan jenis yang berkembang 

lalu . Tanaman jantan biasanya lebih tinggi namun  kurang kuat dibanding tanaman betina. Batang berwarna hijau, tegak, berongga dan beralur longitudinal , Tingginya dapat bervariasi dari 0,2-6 m, walau  sebagian besar tanaman mencapai 

ketinggian 1-3 m. Luas percabangan, juga bergantung pada faktor lingkungan dan  keturunan dan  metode budidaya. Cabang samping bervariasi dari yang oposit dengan  alternate pada bagian batang utama manapun. 

Susunan daun berubah dari decussate (tersusun berlawanan) menjadi  alternate pada bagian ekstremitas tanaman. Batang daun (petioles) panjangnya 2-7 cm  dengan alur sempit di sepanjang sisi atas. Daunnya yaitu  palmate dan terdiri dari 3-

9 lembar lanseolat lurus 3-15 x 0,2-1,7 cm. Tepinya bergerigi kasar, gerigi mengarah ke  ujungnya; pembuluh keluar dengan miring dari pelepah ke ujung gerigi. Permukaan  bawah (abaxial) berwarna hijau pucat dengan kelenjar resinous yang tersebar, putih 

sampai kekuning-kuningan, 

b. Karakteristik Mikroskopis

Cannabis sativa dapat diidentifikasi dengan struktur mikroskopik permukaan  tanaman, yaitu ditandai oleh trikoma (seperti proyeksi rambut dari sel epidermis 

tumbuhan). Dua jenis trikoma dapat dilihat  dengan mikroskop binokuler dengan faktor pembesaran 40 seperti yang ditunjukkan pada Gambar 5. 3. a,b,c,d:

- Trichome non-glandular   banyak, tidak bulat, kaku dan melengkung, dengan .ujung ramping yang runcing:

-Cystolithic trichome yang ditemukan di permukaan atas daun ganja memiliki bentuk cakar beruang yang khas dan mungkin memiliki kristal kalsium karbonat 

(cystoliths) yang terlihat di pangkalannya. sering , trichome rusak dan sistolis terbebas (a);

- Trikoma non-kistolitik berada terutama pada sisi bawah daun, bract dan bracteola 

dan tidak memiliki dasar yang membesar (b... ;

-Trikoma berbentuk cakar beruang di permukaan atas dan trikoma non-cystolithic

yang halus dan ramping pada permukaan bawah daun yaitu  karakteristik ganja.Trikoma glandular terjadi sebagai:

-Kelenjar sessile, yaitu trikoma tanpa tangkai, yang   ditemukan di epidermis bagian bawah (c... ;

-Kelenjar bulbous bulat kecil dengan tangkai bersel satu;

-Batang multiselular panjang pada bracteola mengelilingi bunga betina (trichom  glandular trisomal multisel)(d... .

Trichom kelenjar yaitu  struktur yang mana  resin ganja diproduksi dan disimpan. Ini terutama terkait dengan struktur bunga (tumbuhan pistillate   kaya akan 

struktur ini) namun  juga dapat ditemukan di bagian bawah daun dan kadang  pada batang tanaman muda.

Beberapa tanaman memiliki trikoma yang mungkin mirip dengan yang ada  pada Cannabis sativa namun, kombinasi rambut sistolitik pada permukaan atas daun 

dan trikoma yang lebih panjang dan kelenjar sessile di permukaan bawah, yang unik  untuk Cannabis sativa, memungkinkan identifikasi positif dari bahan yang 

terfragmentasi sekalipun.

c. Preparasi

-Preparasi ganja herbal

Bahan tanaman segar (basah) dikeringkan pada suhu kamar selama beberapa hari atau  dikeringkan pada suhu 70°C sampai daunnya menjadi rapuh. Pada tahap ini, .kandungan air dari bahan tanaman biasanya 8-13 persen. Bahan kering lalu  dipilih secara kasar (hanya bunga dan daun yang dipakai ),  dilumatkan (sebaiknya dengan pemotong dengan kecepatan tinggi, yaitu 100 rps) dan  disaring (ukuran mesh 1 mm). 

- Preparasi resin (damar) ganja

Damar ganja dipotong kecil atau dengan parutan. Sebagai alternatif untuk bahan yang lengket, specimen  didinginkan dengan nitrogen cair dan segera dilumatkan. 

-Preparasi minyak ganja (Hashis oil)

Minyak ganja bisa langsung dianalisa .

d. Tes presumtif

--Tes warna

Tes warna positif hanya memberi indikasi mungkin  adanya bahan yang mengandung ganja dan bukan identifikasi pasti ganja. sebab  itu, wajib bagi analis 

untuk mengkonfirmasi hasil itu  dengan memakai  metode  tambahan yang  lebih khusus . contoh: , sebuah laboratorium memungkinkan kombinasi tes 

warna, kromatografi lapis tipis dan mikroskopi untuk bahan tanaman ganja untuk identifikasi positif, asalkan setidaknya tiga cannabinoids diidentifikasi oleh KLT. Analis  juga   disarankan untuk menganalisa specimen  pengendalian  ganja (contoh nya bahan  referensi yang mengandung campuran standar referensi cannabinoid...  dan blind  specimen  untuk memverifikasi hasil pengujian dan fungsionalitas dan  keandalan semua 

reagen uji.

a... Tes Fast Corint V

1..Pereaksi: 

Reagen A: petroleum eter, reagen B: garam Fast Corint V (1% w atau w Dichloro zinc; 2-

methoxy- 5-methyl-4- (4-methyl- 2-nitrophenyl) diazenyl- benzenediazonium; di 

chloride dalam sodium sulfat anhidrat, reagen C: 1% w atau w sodium bikarbonat dalam air.

2.. Prosedur

Lipat dua kertas saring yang diletakkan satu di atas yang lain, lipat membentuk  corong, letakkan sedikit specimen  bubuk ke bagian tengah kertas atas. Tambahkan  dua tetes reagen A yang memungkinkan cairan untuk menembus ke kertas saring .yang lebih rendah. Buang kertas saring atas dan biarkan kertas saring yang bawah  mengering. Tambahkan sedikit pereaksi B ke bagian tengah kertas saring dan 

tambahkan dua tetes reagen C.

3.. Pengamatan

Adanya bercak berwarna merah ungu di bagian tengah kertas saring yaitu  indikasi  dari produk yang mengandung ganja. THC, CBN dan CBD menghasilkan rona yang  sama.

b. Tes Fast Blue B

1..Pereaksi: 

Reagen A: petroleum eter, reagen B: garam Fast Blue B (1% w atau w Di-oanisidinetetrazolium chloride dalam sodium sulfat anhidrat, reagen C: 10% w atau w 

sodium bikarbonat dalam air

2..Prosedur, sama seperti pada prosedur Fast Corin V.

3.. Pengamatan :

Bercak berwarna merah ungu di bagian tengah kertas saring yaitu  indikasi dari produk yang mengandung ganja. Warna ini yaitu  kombinasi dari warna 

cannabinoids yang berbeda yaitu   komponen utama ganja: THC =  merah, CBN = ungu, CBD = pasien e.

dokumentasi : Garam Fast Blue B harus disimpan dalam kulkas, agar tidak mengeras. 

c...  Rapid Duquenois test (Duquenois-Levine test)

Bisa memakai  cara manual dengan tabung  reaksi atau memakai  reagen kit. 

e. Uji Konfirmasi (Prosedur seperti pada specimen  Biologis)

 KLT (TLc... ,KG (GC  atau  GC-MS),KCKT (HPLc... 

5. analisa  Marijuana dalam specimen  Biologis

a. Test Skrining: 

specimen  : urine,,Metode : Immunochromatografi Kompetitif  Prinsip : Test didasarkan pada kompetisi penjenuhan IgG anti-narkoba yang mengandung substrat enzim(ada dalam keadaan bebas di zone S)

yaitu    Antibodi Pendeteksi dalam Strip   oleh narkoba specimen  atau urine  Antigen dalam Sample   atau narkoba yang sudah  dikonjugasi enzim

  Antigen dalam Strip Test   (ada dan terfiksir di zone T). bila  dijenuhi oleh narkoba dalam specimen  (specimen  positif narkoba), maka IgG anti narkobasubstrat tidak akan berikatan dengan narkoba-enzimnya, sehingga tidak terjadi reaksi enzim-subtrat yang berwarna. Sebaliknya bila  tidak dijenuhi (specimen  negatif narkoba... atau hanya sebagian dijenuhi (specimen  mengandung.narkoba dalam jumlah di bawah ambang batas pemeriksaan atau cut off value... ,.maka IgG anti-narkoba-substrat akan berikatan dengan narkoba-enzimnya secara penuh atau sebagian, sehingga terjadi reaksi enzim-substrat yang berwarna penuh atau samar-samar. Valid tidaknya test dipengendalian  dengan mengikutdan kan pada zone S suatu

pengendalian  validitas yang berupa IgG goat-substrat. sebab  IgG goat bukan antibodi khusus nya narkoba, maka baik pada specimen  urin yang ada, ada

dalam jumlah di bawah ambang batas pemeriksaan atau tidak ada sama sekali narkobanya, semuanya tidak akan menjenuhi dan hanya akan mendifusikan IgG goat-substrat dari zone S ke zone C untuk menemui dan

mengikat IgG anti-IgG goat yang dikonjugasi enzim sehingga terjadi reaksi enzim-substrat yang berwarna di zone C.

4) Alat dan Bahan : Strip test Narkoba

5) Cara Kerja : Biarkan strip test dalam suhu kamar.

Buka penutup strip test, lalu  celupkan strip test itu  secara.vertical ke dalam sample urine selama 10-15 detik.saat  strip test dicelupkan tidak boleh melalui  batas garis yang paling bawah Zona Sample (S).

 tempatkan  test strip itu pada bidang datar, baca hasil sesudah  5-10 menit.

6) Interpretasi Hasil

Positif : Hanya terbentuk pita pink pada Control (c... 

Negative : Terbentuk dua pita pink pada Control (c...  dan pada Test (T)

Invalid : Tidak terbentuk pita pink pada Control (c...  dan pada Test (T) atau

terbentuk pita pink pada Test (T) sedang  pada Control (c...  tidak

terbentuk pita pink

b. Uji Konfirmasi 

1) analisa  THC Metode Kromatografi Lapisan Tipis ( KLT )

2) Prinsip :

Residu hasil hidrolisa yang dilanjutkan dengan ekstraksi yang dielusi dengan 

pelarut tertentu akan membentuk bercak yang berwarna khas.

3) Perlatan:

a... Alat KLT 

1..Plate KLT ( 20 x 20 cm, 10 x 10 cm, 10 x 5 cm )

2.. Bejana kromatografi

3.. Pipakapiler pipet mikro

4.. Botol semprot sprayer

b...  Oven dan lampu UV

4) Reagen :

a. Lapisan tipis Silica Gel G 

b. Eluen, dipilih salah satu :

A : Etil asetat-metanol-amonia-akuades (12 : 5 : 1 : 0.5)

B : Kloroform-metanol-amonia (70 : 30 : 2)

c. Larutan penampak bercak Fast Blue B, harus dibuat baru:

Larutan Fast Blue B Salt 0,1% dalam air, bila   dalam air tidak muncul  

warna, dapat ditambahkan NaOH encer.

d. Larutan standar

Larutan 9-carboxy-THC 1 mg atau mL dalam metanol

5) Cara Kerja:

a... Persiapan specimen

1..Hidrolisis

Hidrolisis alkali

Pipet 10 ml urin kedalam tabung gelas bertutup, untuk pemeriksaan dengan KG 

ditambah standar internal. Tambahkan 2ml kalium hidroksida 10 N, tutup tabung 

dan inkubasi pada 50oC selama 20 menit dengan sekali-kali diaduk. Lanjutkan 

dengan ekstraksi.

2.. Ekstraksi

Prinsip ekstraksi:

9 karboksil THC dari urin yang sudah  dihidrolisa diekstraksi dalam suasana asam. 

Hasil ekstraksi diuapkan pada suhu 35-40oC. Residu siap untuk pemeriksaan 

dengan KLT dan KG.

Cara ekstraksi ada 2

a... Cair-cair

1..Spesimen hasil hidrolisa sesudah  didinginkan, pindahkan ke dalam corong 

pisah, pH diatur sampai 2HCl 2N atau H2SO4 2 N

2.. Tambahkan 15 mL Sikloheksan-etil asetat (7:1, v atau v)

 Ekstraksi dengan mengocok selama 10 menit.

3.. Pindahkan lapisan organik, saring melalui natrium sulfat kering kedalam 

tapered tube, cuci saringan dengan 5 mL pelarut (sikloheksan-etil asetat)

4.. Uapkan sampai kering pada temperatur kamar dengan aliran udara atau 

gas nitrogen, larutkan kembali residu dalam 0,2 mL methanol atau 

asetonitril-methanol (3:1, v atau v) dengan pengocokan atau sonikator.

b...  Solid-phase extraction (SPe... 

1..Kolom SPE yang sesuai dicuci dengan mengalirkan pelan-pelan masingmasing 3 mL methanol, air suling, methanol dan air.

2.. plastic syringe 10 ml dipasangkan pada kolom sebagai reservoir. Gunakan 

vakum dengan kecepatan rendah untuk menaikkan kecepatan aliran.

3.. Urin yang sudah dihidrolisa (2ml) masukkan kedalam kolom, cuci dengan 

10 ml HCL 0,1 N dan 25 mL larutan asam fosfat 50 M dalam asetonitril 10%.

4.. Elusi 9 – carboxy – THC dengan 1 mL aseton. 

5.. Uapkan larutan dibawah aliran gas nitrogen, larutkan kembali dengan 0,1 

mL methanol. 

b...  Pemeriksaan Kromatografi Lapis Tipis

1..Totolkan 5-10 µl larutan standart dan hasil ekstraksi pada plate dengan jarak 2 

cm, lalu  elusi dalam bejana kromatografi dengan salah satu larutan 

eluen.

2.. Keluarkan plate dari bejana kromatografi, lalu  plate dikeringkan sebelum 

disemprot dengan penamoak bercak.

3.. Pengeringan dapat dilakukan pada suhu kamar atau dalam oven pada suhu 

120oC selama 10 menit atau dengan memakai  udara panas dari blower.

4.. Plate yang sudah  dikeringkan disemprot dengan larutan penampak bercak 

lalu  amati dibawah lampu UV.

5) Pembacaan hasil :Bandingkan nilai Rf ekstrak dengan Rf standart

Rf x 100

C. Heroin dan Morfin

1. Asal dan penggolongan 

Opioid dipakai  secara klinis untuk analgesia dan anestesi dan tersedia secara tidak 

sengaja untuk penyalahgunaan oral, inhalasi, atau parenteral. Tanaman opium, Papaver 

somniferum, yaitu  sumber opium. Tanaman ini mengandung lebih dari 20 alkaloid, termasuk 

morfin dan kodein. Mengubah struktur morfin menghasilkan banyak opioid semisintetik, 

termasuk heroin, hydrocodone, hydromorphone, dan thebaine (prekursor oxycodone dan 

naloxone... .

Morfin, kodein, opium dan derivat semi sintetik dari morfin, termasuk golongan obat 

dinamakan  opiat. Opiat yaitu  anlgesik yang kuat juga yaitu  obat yang sering 

disalahgunakan sebab  memicu  euphoria, relaksasi, dan  rasa senang yang berlebihan. 

Opiat dihasilkan dari cairan getah opium poppy yang diolah menjadi morfin lalu  

dengan proses tertentu menghasilkan putauw yang mana  putauw berpotensi kekuatan 10 kali

melebihi morfin. Opioid sintetik yang berpotensi kekuatan 400 kali lebih kuat dari morfin

Melalui proses kimia dan transformasi dalam perdagangan gelap, heroin ada dalam berbagai

bentuk. Berikut ini yaitu  sebagian contohnya:

a. Dua tipe Heroin Asia Barat Daya

Tipe 1: warna dari coklat muda sampai coklat tua, bentuk bubuk, dengan bau opium, 

kemurnian mencapai 60%. Kandungan yang biasa diperoleh : Asetilkodein (5%), Omonoasetilmorfin (3%), Narkotin (10%), Papaverin (4%)

Tipe 2: bubuk kering   halus, putih sampai krem, kemurniannya 80-90%, heroin

berada dalam bentuk garam hidroklorida. Kandungan di dalamnya yaitu : Asetilkodein

(3%), O-monoasetilmorfin (2%), Narkotin (tak terdeteksi Papaverin (tak terdeteksi)

b. Dua tipe Heroin Timur Tengah

Tipe 1

Bubuk halus berwarna coklat (beige... , kemurnian rata-rata yaitu  50%. Kandungan biasa 

ada  yaitu : Asetilkodein (3%), O-monoasetilmorfin (2%),Narkotin (tak terdeteksi), 

Papaverin (tak terdeteksi). Tipe ini sering ada  zat lain (adulterant), kadang  zat obat 

seperti prokain.

Tipe 2

Bubuk halus berwarna putih (off white... . Sebagian mengandung heroin 70-80%, sebagian 

lagi kemurniannya hanya 30-40%. Alkaloid dan derivat ada dalam bentuk hidroklorida. 

Kandungan alkaloid dan derivat yang biasa ada  di dalam heroin dengan kemurnian 

tinggi yaitu : Asetilkodein (2-3%), O-monoasetilmorfin (2%). sedang  yang sudah 

diencerkan hanya mengandung asetilkodein, o-monoasetilmorfin, narkotin, papaverin 

dalam jumlah   kecil (trace... .

c. Dua tipe Heroin Asia Tenggara

Tipe 1 : Heroin yang dihisap (Smoking Heroin) ‘ Chinese No. 3’.

Bahan bergranul keras, warna biasanya abu-abu, kadang coklat kotor, beberapa variasi 

warna granulnya yaitu  merah atau merah muda. Kandungan bahan berwarna abu-abu 

atau coklat kotor yaitu  Kafein (40%), Heroin (20%), O-monoasetilmorfin (5%), Alkaloid

(sedikit).

Tipe 2 : Heroin yang diinjeksi ‘ Chinese No. 4’

Bubuk putih halus mengandung heroin dengan kemurnian tinggi, terdiri dari: 

Monoasetilmorfin (<3 %), Asetil kodein (5%), Narkotin (tak terdeteksi), Papaverin (tak 

terdeteksi). Dalam analisa  laboratorium perlu diperhatikan struktur kimia heroin dan opiat 

yang berkaitan seperti morfin dan kodein.

berdasar  UU Narkotika No. 35 tahun 2009 dan Permenkes No. 2 tahun 2017 heroin 

termasuk golongan I narkotika, tidak diijinkan dipakai  untuk terapi, sebab  memicu  

efek ketergantungan tinggi, sedang  morfin termasuk golongan II narkotika, diijinkan 

dipakai  untuk terapi, memicu  efek ketergantungan sedang.

2. Toksokinetika

a. penyerapan  dan sebaran 

Sebagian besar opioid oral diserap sepenuhnya dari saluran pencernaan dan mencapai 

kadar puncak dalam 1 sampai 1 ½ jam. Metabolisme lintas pertama (first-pass) menonjol , 

menghasilkan bioavailabilitas rendah. contoh: , bioavailabilitas morfin oral hanya 22-

24%. Sebaliknya, kodein dan metadon memiliki rasio potensi oral atau parenteral yang lebih tinggi 

dan memiliki bioavailabilitas 60-79%. Ikatan protein morfin 0% sedang  metabolitnya 20 –

40%. Morfin dan meperidin sering diberikan secara intramuskular, namun penyerapan 

meperidin tidak menentu oleh rute ini. Menghirup asap heroin atau merokok yang dicelupkan 

ke dalam heroin menandakan  farmakokinetik mirip  dengan heroin intravena. Heroin yang 

dihirup dan intravena mencapai kadar puncak dalam waktu 1 sampai 5 menit dan dengan 

cepat menurun ke tingkat deteksi dalam 30 menit. Heroin masuk ke dalam tubuh, dengan 

berbagai cara termasuk hirupan, isapan, suntikan subkutan, atau intravena.

b. Metabolisme dan Ekskresi

Metabolisme secara hepatik dengan baik dalam bentuk morfin-o- glukoronida dan 

hanya sebagian kecil (2-12%) diekskresi tanpa mengalami perubahan bentuk. Metabolit yang 

terbesar (60-80%) diekskresi melalui urine dan hanya jumlah kecil 5-14% diekskresi di dalam 

feses. Konsentrasi morfin dalam urin dalam dosis terapetik sebesar 10 μg atau ml. Seperti juga 

morfin, kodein mengalami metabolism dalam tubuh (Gambar 5.3). Jumlah besar diekskresikan 

dalam bentuk kodein glukoronida. Dalam jumlah kecil (10-15%) didemetilasi membentuk 

morfin dan norkodein, diekskresi dalam urine terutama dalam bentuk glukoronida.

bila  masuk melalui suntikan heroin dengan cepat mengalami reaksi deasetilasi menjadi 

MAM (Mono Asetil Morfin), lalu  terhidrolisa menjadi morfin secara perlahan-lahan.

Sebagian besar metabolit heroin (38,2%) yaitu morfin 3-glucuronida (M3g...  ditemukan dalam 

urine dalam waktu 20-40 jam sesudah  pemberian secara intravena. Metabolit lainnya yaitu 

MAM (1,3%), Morfin bebas (4,2%), Heroin yang tidak berubah (0,1%), dan Norformin

sebab  metabolism yang cepat, heroin tidak dapat dideterminasi langsung dalam 

cairan tubuh (half life 2-3 menit). Biasanya dilakukan dengan penentuan morfin, yang 

yaitu  metabolit yang terutama dalam urine. pemakaian heroin dapat 

dikonfirmasikan dengan penemuan MAM dalam urine.

Metabolit yang khusus  itu  (MAM) hanya dapat ditentukan segera sesudah  

konsumsi heroin (2-8 jam), sesudah  itu MAM mengalami perubahan relative cepat menjadi 

morfin (waktu paruh 0,6 jam). Pemeriksaan MAM memerlukan  modifikasi prosedur 

ekstraksi dan peralatan yang canggih.

c. Toksisitas

Trias toksisitas opioid klasik yaitu  depresi SSP, depresi pernapasan, dan miosis. Tingkat 

kesadaran dapat bervariasi dari euforia hingga disforia dan dari sedasi ringan sampai koma. 

Pasien dapat megalami hyporeflexic, hypothermia, atau hypotensi. 

Penyalahgunaan opioid secara intravena memicu   banyak komplikasi medis, 

termasuk endokarditis; emboli paru septik; pneumonia aspirasi; tuberkulosis; trombosis vena; 

talk dan tepung maizena (dari bahan pencampur) sampai ke retina, paru-paru, hati, dan ginjal; 

nefropati heroin-morfin; tetanus; hepatitis; infeksi virus imunodefisiensi; pneumotoraks; 

pseudoaneurysms; aneurisma mycotic; abses; selulitis; septic arthritis; myopathy; 

osteomielitis; botulisme luka; myelitis; dan pseudo obstruksi usus sekunder akibat impaksi 

feses.

2. analisa  Morfin-Heroin dalam specimen  Biologis

a. Penanganan Spesimen

1) Pengambilan specimen  Urin

a... Spesimen urin diambil dalam keadaan segar.

b...  bila  tidak segera diekstraksi disimpan dalam pendingin (freezer). 

c...  Urin ditampung pada tempat  botol plastic yang kering bersih dan bertutup ulir 

dengan volume tidak boleh kurang dari 20 mL dan diberi tanda ,antaralain :  

nama pasien, tanggal pengambilan, area  pengambilan dan informasi lain yang 

diperlukan .

d...  Urin dapat disimpan dalam suhu kamar selama 24 jam pada 4-10ºC selama 2-3 

hari, bila lebih dari 3 hari dibekukan dalam freezer.

b. Ekstraksi

1) Prinsip :

Heroin yang ada  dalam urine terdeteksi dengan adanya metabolitnya (MAM) 

yang mengalami perubahan relative cepat menjadi morfin. Morfin diekstraksi dengan 

pelarut organic pada pH 8,5-9, hasil ekstraksi disaring dan dikeringkan sehingga 

diperoleh  residu yang dianalisa secara kualitatif (KLT) dan kuantitatif (Kg... .

2) Peralatan :

a... Vortex mixer

b...  Shaker

c...  Sentrifuge

d...  Tapered tube berskala 10 ml

e...  Corong pisah

f...  Corong

g...  Batang gelas pengaduk

h) Penangas air

i) Sonikator

3) Reagen

a... Pelarut organic

1..Kloroform : isopropanol (9:1 v atau v)

2.. Diklorometan : isopropanol (9:1 v atau v)

3.. Etil asetat

b...  Asam klorida (HCl 0,5 M)

c...  Methanol

d...  Natrium sulfat (Na2SO4) anhidrat

e...  Gas nitrogen

f...  Kertas saring

g...  Kertas saring silicon

4) Cara kerja :

a... Hidrolisa

Hidrolisa dapat dilakukan dengan salah satu cara di bawah ini:

1..Hidrolisa dengan Asam

Dalam tabung bertutup volume 50 ml, masukkan 10 ml urine tambahkan 1 ml 

HCl pekat campur baik-baik. Buka tutupnya, inkubasi dalam penangas air pada 

suhu 100ºC selam 60 menit. Didinginkan, lalu  dilanjutkan dengan 

ekstraksi.

2.. Hidrolisa enzimatik

Specimen urine (5-10 ml) atur pH sampai 7 dengan penambahan asam asetat 

bila   bereaksi basa. lalu  tambahkan 0,1 ml buffer Natrium asetat, 

asam asetat (pH 5,5) dan 0,002 ml enzim β glukoronidase (75 unit atau ml) per ml 

urine.

Inkubasi selama 24 jam pada suhu 37ºC atau selama 1 jam pada suhu 55ºC. 

suhu tidak boleh lebih dari 55ºC untuk mencegah denaturasi enzim.

lalu  dilanjutkan dengan ekstraksi.

Hidrolisa asam dan hidrolisa enzimatik merubah MAM menjadi morfin.

b...  Ekstraksi

1..pH urine diatur pada 8,5-9 dengan penambahan amonia campur dalam 

vortex mixer. Ekstraksi dengan salah satu pelarut organic yaitu, kloroformisopropanol (9:1 v atau v), diklorometan-isopropanol (9:1 v atau v), etil asetat, yang 

volumenya 2 kali volume urine.

Ekstraksi dilakukan dengan cara ekstraksi dengan pelarut organic 2 kali, tiap 

kali dengan 10 ml.

2.. Biarkan lapisan air memisah sempurna dari lapisan pelarut organic 

kumpulkan lapisan organik.

3.. bila   terjadi emulsi, saring dengan kertas saring silicon untuk menyaring 

ekstrak. Pecahkan emulsi dengan sonikator.

4.. Susaha  ekstrak dalam keadaan bening atau bersih, ekstraksi kembali larutan 

organic dengan 6 ml HCl 0,5 M.

5.. Tampung lapisan organic. pH lapisan air diatur pada 8,5 – 9, lalu  

diekstraksi kembali dengan salah satu pelarut diatas.

6.. Pisahkan lapisan organic, jadikan satu dengan lapisan organik sebelumnya, 

saring larutan melalui sedikit Na2SO4 kering, cuci saringan dengan 5 ml fase 

organik.

7.. Pekatkan larutan sampai 1-2 ml dan uapkan pelarut dibawah gas nitrogen 

atau dengan penangas air pada suhu tidak lebih dari 55ºC sampai kering.

Pemekatan dengan rotary evaporator atau Kuderna Danish Konsentrator.

Untuk pemeriksaan dengan Kromatografi Gas pemekatan disarankan 

dengan KG Konsentrator.

8.. Untuk pemeriksaan KLT atau analisa kromatografi gas larutkan kembali 

residu dalam 0,1 ml methanol atau methanol-kloroform (9:1).

bila   specimen  cepat kering, larutkan kembali dengan methanol atau 

methanol-kloroform 1-2 ml.

c. Metode pemeriksaan

a. Pemeriksaan secara kualitatif dengan Kromatografi Lapisan Tipis

1) Prinsip :

Residu hasil ekstraksi dielusi dengan eluen tertentu, lalu  ditetapkan secara 

KLT sehingga terbentuk bercak yang berwarna khas.

2) Peralatan :

a... Alat KLT lengkap :

1..Plate kaca 20 x 20 cm, 10 x 10 cm, 10 x 5 cm

2.. Bejana kromatografi

3.. Botol semprot atau sprayer

4.. Pipet kapiler atau pipet mikro

b...  Lampu UV 254 nm

c...  pH meter

d...  Sentrifuge

e...  Oven

3) Reagen :

a... Adsorben : silica gel G, tebal 0,2 mm

b...  Eluen, dipilih salah satu :

1..Sistem A : toluene- aceton- etanol- ammonia (45 : 45 : 7 :3)

2.. Sistem B : Etil asetat- Methanol - Ammonia (85 : 10 : 5)

c...  Penampak bercak dipilih salah satu:

1..Kalium iodoplatinat:

Larutkan 0,25 g platinik klorida dan 5 g KI dalam air suling sampai 100, 

tambahkan 2 ml HCl pekat.

2.. Reagen Dragendorff

Larutan A: Campur 2 gr bismuth subnitrat (bismuth oksinirat), 25 ml asam 

asetat glacial atau pekat dan 100 ml air suling.

Larutan B: Larutan 40 gr KI dalam 100 ml air suling. 

Campur 10 ml larutan A dan 10 ml larutan B, + 20 ml asam asetat glacial + 

100 ml air suling.

3.. Reagen fluoresensi :

(a... Buffer AMP (2-amino 2-metil 1,3 propandiol:

Tambahkan 105 mg 2-amino 2-metil 1,3 propandiol ke dalam 18,8 ml HCl 

pekat dan encerkan dengan air sampai 1000 ml (pH = 9,3 ± 0,2)

(b...  Larutan kalium ferri sianida :

Larutkan 58 mg kalium ferri siabercak dalam 100 ml air suling.

Simpan dalam lemari es, siapkan larutan yang baru 1 minggu.

d...  Standar Morfin dan codein

Buat larutan standar 1 mg atau ml dalam methanol.

Garam atau basanya bisa dipakai  sebagai standar, sebab  pada KLT 

senyawa itu  akan terpisah sebagai basa bebas

c...  Cara kerja KLT

1..Totolkan 5-10 µl larutan standard dan hasil ekstraksi pada plate dengan jarak 

2 cm, lalu  elusi dengan bejana kromatografi dengan salah satu larutan 

eluen.

2.. Keluarkan plate dari bejana kromatografi lalu  plate dikeringkan 

sebelum disemprot dengan larutan penampak bercak.

3.. Pengeringan pada suhu kamar atau di dalam oven pada suhu 120ºC selama 

10 menit atau dengan memakai  udara panas dari blower.

4.. Plate yang sudah  kering disemprotkan dengan laruan penampak bercak.

lalu  sesudah  kering diamatai.

dokumentasi  : 

Eluen dengan system A akan memberi  hasil lebih bagus bila   menggunaka 

penampak bercak Dragendorf.

Eluen dengan system B akan memberi  hasil yang lebih bagus bila   

memakai  penampak bercak iodoplatinat.

b. Pemeriksaan secara kuantitatif dengan kromatografi gas

1) Prinsip :

Derivatisasi hasil ekstraksi dilarutkan dengan pelarut tertentu, diinjeksikan ke dalam 

injektor pada keadaan  tertentu, sehingga dapat diketahui waktu retensi, luas area 

dan puncak kromatogram yang dihasilkan.

2) Peralatan :

a... Derivatisasi :

1..Tapered tube (tabung runcing berskala... 10 ml

2.. Labu ukur 10 ml

b...  Kromatografi gas

3) Reagen :

a... Standar kalibrasi : morfin, nalorfin

b...  Derivatisasi :

1..BSA (N,O-bistrimetil silil asetamin)

2.. MSTFA (N-metil N-trimetilsilil trifluro asetamid... 

3.. HMDS (Heksan metal disilasan)

4.. TMCS (Trimetil Klorosilan)

5.. Piridin

6.. PFTA (Penta fluoro propianat anhidrat)

7.. Etil asetat

c...  Kromatografi gas

1..Gas nitrogen

2.. Kolom

4) Cara Kerja :

a... Pembuatan larutan standar kalibrasi

Dibuat larutan induk morfin, nalorfin dengan kadar 1 mg atau mL dalam methanol.

Dari larutan induk tersbeut dibuat larutan standar kalibrasi dalam air suling 

dengan konsentrasi antara 0-10 µg atau mL morfin dalam 5 µg nalorfin.

Nalorfin dipakai  sebagai standar internal.

b...  Derivatisasi spesimen ada 2 pilihan

1..Sililasi :

(a... Ekstrak urin diuapkan sampai kering dengan uap nitrogen

(b...  Residu yang terbentuk di derivatisasi dengan 20 µl N, O-bis trimetil 

sililasetamid (BSa... dalam vial tertutup dengan pemanasan 85 ºC selama 

15 menit (BSA dapat diganti dengan campuran reagen sililasi dan piridin 

= 1 : 1 v atau v).

Campuran itu  disuntikkan ke dalam kromatografi gas.

bila  dipakai detektor NPD, reagen silisasi seperti N-metil-N-trimetilsilil 

triflouroasetamid (MSTFa... atau campuran heksa metildisilasan (HMDS), 

trimetil klorosilan (TMCS) dan piridin.

(c...  Derivatisasi harus dipersiapkan segera sebelum dianalisa, sebab  reagen 

derivatisasi silil tidak stabil. 1-2 µl larutan standar kalibrasi dan hasil 

derivatisasi diinjeksikan ke dalam injektor.

2.. Asilasi :

(a... Tambahkan 50 µl penta fluoropropionik anhidrat (PFPa... ke dalam hasil 

ekstraksi urin, panaskan campuran itu  selama 30 menit pada 65 ºC 

di dalam tabung tertutup.

(b...  Uapkan kelebihan reagen PFPA dengan uap nitrogen.

(c...  Larutkan residu dengan 50 µl etil asetat.

(d...  Derivatisasi stabil dalam reagen selama beberapa bulan dan sesudah  

penguapan reagen, stabil dalam waktu 24 jam.

1-2 µl larutan standar kalibrasi dan hasil derivatisasi diinjeksikan ke 

dalam injektor.

c...  Kromatografi gas dengan keadaan  sebagai berikut :

1..Detektor FID atau NPD

2.. Kolom : packed kolom 2 m x 2-4 mm ID

(a... Dimetil silicon (SE 30, OV-1)

(b...  Phenil metal silicon, 50% phenil (OV-17)

3.. Gas nitrogen: kecepatan aliran nitrogen pada 70 ml atau menit.

4.. Suhu : 

(a... Injektor 275 ºC

(b...  Oven 230 ºC

(c...  Detektor 275 ºC

5) Pembacaan hasil : Hasil pemeriksaan tercantum pada print out.

D. KOKAIN

1. penggolongan  

Kokain termasuk narkotika golongan I. Kokain yaitu  alkaloid dengan nama kimia 

benzoilmetilecgonin yang diperoleh dari daun tanaman Erytoxylus coca. Kokain yaitu  

salah satu narkotika yang banyak disalahgunakan. Bentuk yang dihisap dinamakan    crack   atau 

kokain base yang bersifat   ketagihan , dan efeknya cepat.

2. Toksokinetika

Kokain masuk ke dalam tubuh dengan berbagai cara seperti intra nasal, intra vena, 

intra muskuler, oral dan dihirup. Kokain yaitu  stimulant yang kuat pada  susunan 

saraf pusat, mempertinggi kesiagaan, mencegah nafsu makan, memicu  keinginan untuk 

tidur dan euphoria (perasaan senang yang berlebihan) yang kuat.

Kokain mengalami metabolisme dalam tubuh, hanya 1% dari dosis yang dikeluarkan 

dalam urin dalam bentuk yang tidak berubah. Sebagian besar metabolit kokain yaitu  

benzoilecgonin (BE, 25-40% dari dosis) dan Ecgonin metil ester (EME, 18-22% dasi dosis). 

Sebagian kecil metabolit berupa ecgonin, yaitu  hasil hidrolisis lanjut dari BE dan EME.

Metabolisme kokain:

D

3. analisa  Kokain dalam specimen  Biologis 

a. Pengambilan spesimen

Spesimen urin diambil dalam keadaan segar, bila  tidak segera diekstraksi, disimpan 

dalam freezer bisa sampai >3 hari. Urin ditampung dalam tempat  botol plastic kering, 

bersih, bertutup ulir dengan volume tidak kurang dari 20 ml, diberi label. Urin disimpan 

dalam suhu kamar 24 jam, 4 – 10 C selama 2 – 3 hari

b. Uji screening

Metode LFI atau ICT

c. Ekstraksi 

1) Reagen buffer boraks

2) Buffer ammonia

3) Pelarut ekstraksi : diklorometana-isopropanol (85:15); kloro-iso (50:50)

4) Na2SO4 kering

Spesimen diatur pHnya sampai 9 ( 8 – 9,5) dengan buffer, ekstraksi dengan pelarut 2 x 

20 ml. Tampung pelarut, saring, cuci penyaring, uapkan dengan vakum lalu  

kerjakan KLT

d. Metode Kromatografi Lapisan Tipis (KLT)

1) Prinsip :

Residu hasil ekstraksi dielusi dengan eluen tertentu, lalu  ditetapkan secara 

Kromatografi Lapis Tipis (KLT) sehingga terbentuk bercak yang berwarna khas.

2) Peralatan :

a... Alat KLT : Plate KLT (20X20 cm, 10x10cm, dan 10x5 cm), bejana kromatografi

b...  Lampu UV

3) Reagen

a... Eluen, dipilih salah satu :

A : Metanol – ammonia (100 : 1,5) 

B : Kloroform – methanol (50 : 50 )

b...  Larutan penampak bercak , dipilih salah satu :

1..Reagen Dragendorf:

Larutan A :

Campur 2 gr Bismut subnitrat (Bismut Oksinitrat), 25 ml asam asetat glasial 

pekat atau 100 ml air.

Larutan B :

Larutan 40 gr KI dalam 100 ml air

Campur 10 ml larutan A dan 10 ml larutan B + 20 ml asam asetat galsial + 100 

ml air suling

2.. reagen: Kalium Iodoplatinat yang diasamkan

Larutan 0,25 gr platinat klorida dan 5 gr KI dalam air suling sampai 100 ml, 

tambahkan 2 ml HCL pekat

3.. asam sulfat pekat 1 ml ditambahkan perlahan-lahan pada 10 ml larutan ferri 

klorida (5% w atau v) dan campurkan

c...  Larutan Standar :

Larutan standar 1 mg atau ml BE (Benzoylecgonine... , kokain base dan Ecgonin metil 

ester dalam metanol.

4) Cara Kerja

a... Ekstraksi

Prinsip Ekstraksi :

Kokain diekstraksi dengan pelarut organik dalam suasana basa pada PH 8-9,5. 

Spesimen diatur pH sampai 9 (8 – 9,5) dengan buffer yang tepat. Hasil ekstraksi 

diuapkan, residu siap untuk pemeriksaan dengan alat KLT dan alat KG.

Cara Ekstraksi :

1..memicu  larutan buffer

- Buffer borax (PH 9-9,6)19,07 gr natrium tetraborat (Na2B4O7.10H2O) dalam 1 liter air

- Buffer Ammonia (PH 9,5) 

10,7 gr ammonium klorida dilarutkan dalam 40 ml larutan ammonia 5 M 

tambahkan air suling sampai 1 L.

2.. Spesimen urin sebanyak 20 ml diatur PH-nya sampai 9 (8-9,5) dengan 

buffer.

3.. Dengan pelarut ekstraksi diklorometan – isopropanol (85 : 15 v atau v) sebanyak 

40 ml atau kloroform isopropanol (50:50 v atau v) dua kali, tiap kali dengan 

larutan ekstraksi 20 ml.

4.. Diamkan lapisan memisah, lapisan air (atas) dan lapisan ekstrak organik 

(bawah). bila   terjadi emulsi gunakan kertas saring silikon

5.. Tampung ekstrak organic, saring melalui kertas saring yang berisi sedikit 

natrium sulfat kering.

6.. Saringan dicuci dengan pelarut ekstraksi 5 ml, hasil ekstraksi diuapkan 

sampai kering dengan pompa vakum atau uap nitrogen. Ekstrak siap dipakai 

untuk penetapan secara Kromatografi Lapisan Tipis (KLT) dan Kromatografi 

Gas (Kg... .

b...  Pemeriksaan KromatografI Lapisan Tipis

1..Ekstrak urin yang sudah dikeringkan dilarutkan dalam 50 ul metanol

2.. Totolkan 5-10 ul larutan standar dan hasil ekstraksi pada plate dengan jarak 

2 cm, lalu  elusi dalam bejana kromatografi dengan salah satu larutan 

eluen

3.. keluarkan plate dari bejana kromatografi lalu  dikeringkan

4.. pengeringan dapat dilakukan pada suhu kamar atau dalam oven pada suhu 

1200C selama 10 menit atau dengan memakai  udara panas dari blower

5.. plate yang sudah  kering disemprot dengan larutan penampak bercak, 

lalu  dilihat  dengan lampu UV

e. Metode Kromatografi Gas (Kg... 

1) Prinsip :

Residu hasil ekstraksi yang dilanjutkan dengan derivatisasi dilarutkan dengan 

pelarut kloroform, metanol disuntikkan kedalam kromatografi gas dengan keadaan  

tertentu sehingga dapat diketahui waktu retensi (Rt) luas area dan puncak 

kromatografi yang dihasilkan.

2) Peralatan :

Derivatisasi :

a... Vortex mixer

b...  Heating block

c...  Pipet mikro

d...  Kromatografi gas

3) Reagen

Derivatisasi:

a... Pentafluoropropionik anhidrida (PFPA)

b...  Pentafluoro-propanol (PFPOL)

c...  Etil asetat

d...  Gas nitrogen

e...  Larutan Standar Kalibrasi

Pembuatan larutan kalibrasi :

Buat larutan induk 1 mg atau ml dari kokain, BE dan ecgonine metil ester dari internal 

standar dalam methanol. 

Siapkan larutan standar urin dari larutan induk yang mengandung kokain 0,5 

ug atau ml, benzoilecgonin dan ecgonine metil ester 0-25 ug atau ml internal standar = 25 

ug atau ml

Larutan standar kalibrasi dikerjakan dengan cara yang sama dengan spesimen 

4) Cara Kerja 

a... Ekstraksi (Lihat Ekstraksi Metoda KLT)

b...  Derivatisasi

1..Urin tambahkan 50 µl PFPA dan 25 µl PFPOL ke dalam ekstrak kering hasil 

ekstraksi. Kocok di atas vortex mixer dan panaskan di atas heating block 

pada suhu 90oC selama 15 menit.

2.. Biarkan tabung sampai dingin dan uapkan ekstrak spesimen sampai kering 

pada suhu 480 C dengan aliran gas nitrogen, lalu  larutkan residu 

dalam 25 µl etil asetat.

3.. Injeksikan 1-2 µl larutan standar kalibrasi dan hasil derivatisasi ke dalam 

injektor

4.. Derivat PFPA stabil dalam reagen 1 bulan dan 24 jam sesudah  reagen 

diuapkan.

c...  Pemeriksaan Kromatografi Gas

keadaan nya sebagai berikut :

1..Detektor : NPD atau FID

2.. Kolom : Packed column *) :

i. Dimetil silikon (SE-30, OV-1)

ii. Fenil metil silikon, 50% fenil (OV-17)

3.. Suhu : 

i. oven : 2200 C

ii. Injektor : 2200 C

iii. Detector : 3000 C

4.. Gas : Nitrogen dengan kecepatan alir 30 ml atau menit

i. Hidrogen dengan kecepatan alir 30 ml atau menit

ii. Cappilary Column ,

pengertian psikotropika yaitu  zat atau obat, baik alamiah maupun sintetis

bukan narkotika, yang berkhasiat psikoaktif melalui pengaruh selektif pada 

susunan saraf pusat yang memicu  perubahan khas pada aktivitas mental dan perilaku. 

Psikotropika digolongkan menjadi 4 golongan.